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shipolande

新虫 (初入文坛)

[求助] 土壤微生物16s rDNA 18s rDNA 抑制扩增不出来??????

土壤微生物16s rDNA 18s rDNA 一直扩增不出来,微生物总DNA是用试剂盒提取的,图示为土壤提取的DNA模板,可是一直就是P不出来,不知道是什么原因,自己稀释了10倍,50倍,100倍,只有50倍 的稍微有一点条带,但是很不明显,不知道什么原因,请大侠们指点指点 ,小弟不胜感激···········
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shipolande
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mayanwz

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

首先确认你的PCR原料没有问题或者过期的(比如引物,酶等等);
第二从你的电泳条带来,DNA跑了这么远?是不是电压过高或者电泳时间过长;
第三适当改变PCR条件,你退火温度是否太高,适当降低或者提高。
坚持到底就是胜利
12楼2012-09-18 17:12:52
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maomao1426

木虫 (著名写手)

可能是土壤里腐殖质太多,需要除掉的。
2楼2012-07-02 08:45:37
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zqk0532

铁杆木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
因为细菌的GC含量通常比较高,所以建议使用GC buffer P
3楼2012-07-02 10:10:51
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swaucq

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
总DNA切胶回收纯化过吗?
不卑不亢
4楼2012-07-02 22:02:40
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