24小时热门版块排行榜    

Znn3bq.jpeg
查看: 2418  |  回复: 13

XiaoyanY

新虫 (初入文坛)

[交流] 6%变性聚丙酰胺凝胶电泳SSR引物筛选 已有6人参与

我是SSR引物筛选新手,有好多问题呀,请各位高手指点迷津~
(1)我是跑的六一厂24B型号,很小的那种垂直电泳槽,染色时胶要与玻璃板脱离,我做的是1mm的6%变性聚丙烯酰胺凝胶,在固定、染色、显色的过程中要转移凝胶,胶很容易就弄碎了,请问有什么好方法可以防止胶块碎裂啊?
(2)我用的500ml的显色液,将两块胶一起染色,显色液中包括15g的Na2CO3,750ul的甲醛溶液和50ul的硫代硫酸钠,我是先将Na2CO3溶解在500ml的蒸馏水中,放入冰箱冷却,拿出来后再加入甲醛和硫代硫酸钠。在显色过程中显色不均是什么原因啊?就是条带有的出现的早有的出现的晚,最后导致有的染的特别深,有的染的特别浅。
(3)我用的方法都与之前师兄师姐跑的那种最大的玻璃板是一致的,只是因为胶更小,所以我用的试剂都按一定比例缩小了,就如上面的显色液的配方,缩小了1/4,这样做可行吗?
问题还有很多,急需各位帮助,谢谢啊!
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

fighting~
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

游侠892

铁杆木虫 (著名写手)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
1、“胶块碎裂”是不是你配制的胶有问题。配方是不是存在问题。
2、显色有深有浅,不知道是不是你的胶厚薄不均一?这种情况在我们实验室也出现过。
3、缩小了1/4是什意思?浓度应该还是没变的,只是按比例减少而已。
路漫漫其修远兮,吾将上下而求索
2楼2012-07-01 10:05:43
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

XiaoyanY

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 游侠892 at 2012-07-01 10:05:43
1、“胶块碎裂”是不是你配制的胶有问题。配方是不是存在问题。
2、显色有深有浅,不知道是不是你的胶厚薄不均一?这种情况在我们实验室也出现过。
3、缩小了1/4是什意思?浓度应该还是没变的,只是按比例减少而已 ...

1.我的配方是1LPAGE中含420g的尿素和150ml的丙烯酰胺/双丙烯酰胺(19:1)原液,100ml的10xTBE。之前师姐跑大板是用的这个配方,她用着没问题。但我也不清楚换做我这种小板会不会有什么问题···
2.‘胶的厚薄不一’我觉得应该不可能,我两块玻璃之间都是由一样厚度的胶条隔开的,下方没有放胶条,除了插梳子的那一面我都用胶带封好了,也没见漏胶.在凝胶时也感觉放平了···
3.就是浓度没变,只是按比例减少的意思。不知道这样转移使用本身有木有问题···
fighting~
3楼2012-07-01 16:12:40
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

虫虫博士

新虫 (小有名气)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
1.胶易破碎,可能是因为染色-冲洗-显色等步骤,摇晃力道太大以及转移次数太多。我所有过程只用一个塑料盒,放到摇床上低速摇动,一帮不会烂胶,你可以试试。
4楼2012-07-02 14:14:57
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

虫虫博士

新虫 (小有名气)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
2. 染色深浅不一,还是因为染色或显色液不能均匀覆盖胶块,建议一个槽中凝胶不要放的太多,染色液特别是显色液尽量多些,使胶块充分地浸在水中。
5楼2012-07-02 14:20:16
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

虫虫博士

新虫 (小有名气)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
3. 染色/显色液的浓度本来就是可以调节的,只要能显出清晰的条带,就没有问题,可以继续使用。
6楼2012-07-02 14:22:50
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

XiaoyanY

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
4楼: Originally posted by 虫虫博士 at 2012-07-02 14:14:57
1.胶易破碎,可能是因为染色-冲洗-显色等步骤,摇晃力道太大以及转移次数太多。我所有过程只用一个塑料盒,放到摇床上低速摇动,一帮不会烂胶,你可以试试。

嗯,今天打算这样做,谢谢!
fighting~
7楼2012-07-02 19:09:37
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

XiaoyanY

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
6楼: Originally posted by 虫虫博士 at 2012-07-02 14:22:50
3. 染色/显色液的浓度本来就是可以调节的,只要能显出清晰的条带,就没有问题,可以继续使用。

谢谢~
fighting~
8楼2012-07-02 19:11:46
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

XiaoyanY

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
5楼: Originally posted by 虫虫博士 at 2012-07-02 14:20:16
2. 染色深浅不一,还是因为染色或显色液不能均匀覆盖胶块,建议一个槽中凝胶不要放的太多,染色液特别是显色液尽量多些,使胶块充分地浸在水中。

嗯,摇晃的速度对显色好染色的影响大吗?另外,我做的那种小型的变性胶中点样孔内的尿素吹出来有点麻烦,你们实验室有没有什么好方法啊?
fighting~
9楼2012-07-02 19:14:40
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

XiaoyanY

新虫 (初入文坛)

10楼2012-07-08 15:38:40
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 XiaoyanY 的主题更新
普通表情 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 070300化学学硕311分求调剂 +17 梁富贵险中求 2026-04-04 18/900 2026-04-08 22:53 by may_新宇
[考研] 278求调剂 +21 范婷娜 2026-04-07 24/1200 2026-04-08 22:48 by may_新宇
[考研] 293调剂 +20 yj1221 2026-04-08 21/1050 2026-04-08 22:37 by 猪会飞
[考研] 一志愿211,化学310分,本科重点双非,求调剂 +13 努力奋斗112 2026-04-08 13/650 2026-04-08 21:17 by 学员tURuqU
[考研] 机械工程313分找工科调剂 +3 双一流本科机械 2026-04-08 3/150 2026-04-08 20:41 by 土木硕士招生
[考研] 材料调剂 +4 hzhahg 2026-04-06 4/200 2026-04-08 16:20 by luoyongfeng
[考研] 一志愿211,化学学硕,310分,本科重点双非,求调剂 +10 努力奋斗112 2026-04-07 10/500 2026-04-08 15:01 by screening
[考研] 0702物理学学硕299求调剂 +4 祁柒连 2026-04-06 4/200 2026-04-08 13:56 by wutongshun
[考研] 求调剂 一志愿西南交通大学085701环境工程 282分 +15 多多爱吃汉堡 2026-04-04 16/800 2026-04-08 11:39 by i_cooler
[考研] 285求调剂 +18 AZMK 2026-04-02 19/950 2026-04-08 10:33 by xingguangj
[考研] 305求调剂 +3 77Qi 2026-04-07 3/150 2026-04-07 23:18 by jp9609
[考研] 081700,311,求调剂 +17 冬十三 2026-04-04 18/900 2026-04-07 12:50 by Sammy2
[考研] 292求调剂 +4 lilllllxccc 2026-04-05 5/250 2026-04-07 09:29 by 纺大杨老师
[考研] 化学357分,考研调剂 +11 .Starry. 2026-04-04 12/600 2026-04-06 06:28 by houyaoxu
[考研] 生物与医药调剂 +4 十七sa 2026-04-05 4/200 2026-04-05 20:05 by lys0704
[考研] 数一英一274机械调剂 +5 星陨流霞 2026-04-04 6/300 2026-04-05 11:38 by arrow8852
[考研] 400分求调剂 +3 尴尬且挠头 2026-04-04 3/150 2026-04-04 08:41 by jp9609
[考研] 283分材料与化工求调剂 +29 罗KAKA 2026-04-02 29/1450 2026-04-03 23:56 by userper
[考研] 350一志愿北京航空航天大学08500材料科学与工程求调剂 +5 kjnasfss 2026-04-03 5/250 2026-04-03 22:29 by 无际的草原
[考研] 工科341分调剂 +3 洛多罗 2026-04-03 3/150 2026-04-03 14:20 by 1753564080
信息提示
请填处理意见