应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 6%变性聚丙酰胺凝胶电泳SSR引物筛选
141/2返回列表12下一页
查看: 2366  |  回复: 13
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

XiaoyanY

新虫 (初入文坛)

[交流] 6%变性聚丙酰胺凝胶电泳SSR引物筛选 已有6人参与

我是SSR引物筛选新手，有好多问题呀，请各位高手指点迷津~
（1）我是跑的六一厂24B型号，很小的那种垂直电泳槽，染色时胶要与玻璃板脱离，我做的是1mm的6%变性聚丙烯酰胺凝胶，在固定、染色、显色的过程中要转移凝胶，胶很容易就弄碎了，请问有什么好方法可以防止胶块碎裂啊？
（2）我用的500ml的显色液，将两块胶一起染色，显色液中包括15g的Na2CO3，750ul的甲醛溶液和50ul的硫代硫酸钠，我是先将Na2CO3溶解在500ml的蒸馏水中，放入冰箱冷却，拿出来后再加入甲醛和硫代硫酸钠。在显色过程中显色不均是什么原因啊？就是条带有的出现的早有的出现的晚，最后导致有的染的特别深，有的染的特别浅。
（3）我用的方法都与之前师兄师姐跑的那种最大的玻璃板是一致的，只是因为胶更小，所以我用的试剂都按一定比例缩小了，就如上面的显色液的配方，缩小了1/4，这样做可行吗？
问题还有很多，急需各位帮助，谢谢啊！
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
fighting~
1楼 2012-06-30 12:44:47
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

游侠892

铁杆木虫 (著名写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
1、“胶块碎裂”是不是你配制的胶有问题。配方是不是存在问题。
2、显色有深有浅，不知道是不是你的胶厚薄不均一？这种情况在我们实验室也出现过。
3、缩小了1/4是什意思？浓度应该还是没变的，只是按比例减少而已。
赞一下 回复此楼
路漫漫其修远兮，吾将上下而求索
2楼2012-07-01 10:05:43
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

XiaoyanY

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 游侠892 at 2012-07-01 10:05:43
1、“胶块碎裂”是不是你配制的胶有问题。配方是不是存在问题。
2、显色有深有浅，不知道是不是你的胶厚薄不均一？这种情况在我们实验室也出现过。
3、缩小了1/4是什意思？浓度应该还是没变的，只是按比例减少而已 ...

1.我的配方是1LPAGE中含420g的尿素和150ml的丙烯酰胺/双丙烯酰胺（19:1）原液，100ml的10xTBE。之前师姐跑大板是用的这个配方，她用着没问题。但我也不清楚换做我这种小板会不会有什么问题···
2.‘胶的厚薄不一’我觉得应该不可能，我两块玻璃之间都是由一样厚度的胶条隔开的，下方没有放胶条，除了插梳子的那一面我都用胶带封好了，也没见漏胶.在凝胶时也感觉放平了···
3.就是浓度没变，只是按比例减少的意思。不知道这样转移使用本身有木有问题···
赞一下 回复此楼
fighting~
3楼2012-07-01 16:12:40
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

虫虫博士

新虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
1.胶易破碎，可能是因为染色-冲洗-显色等步骤，摇晃力道太大以及转移次数太多。我所有过程只用一个塑料盒，放到摇床上低速摇动，一帮不会烂胶，你可以试试。
赞一下 回复此楼
4楼2012-07-02 14:14:57
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

虫虫博士

新虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
2. 染色深浅不一，还是因为染色或显色液不能均匀覆盖胶块，建议一个槽中凝胶不要放的太多，染色液特别是显色液尽量多些，使胶块充分地浸在水中。
赞一下 回复此楼
5楼2012-07-02 14:20:16
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

虫虫博士

新虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
3. 染色/显色液的浓度本来就是可以调节的，只要能显出清晰的条带，就没有问题，可以继续使用。
赞一下 回复此楼
6楼2012-07-02 14:22:50
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

XiaoyanY

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by 虫虫博士 at 2012-07-02 14:14:57
1.胶易破碎，可能是因为染色-冲洗-显色等步骤，摇晃力道太大以及转移次数太多。我所有过程只用一个塑料盒，放到摇床上低速摇动，一帮不会烂胶，你可以试试。

嗯，今天打算这样做，谢谢！
赞一下 回复此楼
fighting~
7楼2012-07-02 19:09:37
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

XiaoyanY

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
6楼: Originally posted by 虫虫博士 at 2012-07-02 14:22:50
3. 染色/显色液的浓度本来就是可以调节的，只要能显出清晰的条带，就没有问题，可以继续使用。

谢谢~
回复此楼
fighting~
8楼2012-07-02 19:11:46
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

XiaoyanY

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
5楼: Originally posted by 虫虫博士 at 2012-07-02 14:20:16
2. 染色深浅不一，还是因为染色或显色液不能均匀覆盖胶块，建议一个槽中凝胶不要放的太多，染色液特别是显色液尽量多些，使胶块充分地浸在水中。

嗯，摇晃的速度对显色好染色的影响大吗？另外，我做的那种小型的变性胶中点样孔内的尿素吹出来有点麻烦，你们实验室有没有什么好方法啊？
赞一下 回复此楼
fighting~
9楼2012-07-02 19:14:40
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

XiaoyanY

新虫 (初入文坛)
10楼2012-07-08 15:38:40
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 XiaoyanY 的主题更新
141/2返回列表12下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 0703化学调剂 +9 妮妮ninicgb 2026-03-15 13/650 2026-03-19 22:13 by l1006507827
[考研] 招收调剂硕士 +4 lidianxing 2026-03-19 10/500 2026-03-19 16:05 by 余麟余
[考研] 求调剂，一志愿:南京航空航天大学大学 ，080500材料科学与工程学硕，总分289分 +3 @taotao 2026-03-19 3/150 2026-03-19 14:07 by peike
[考研] 0703化学调剂 +5 pupcoco 2026-03-17 8/400 2026-03-19 13:58 by houyaoxu
[考研] 一志愿南昌大学，327分，材料与化工085600 +3 Ncdx123456 2026-03-19 3/150 2026-03-19 13:18 by houyaoxu
[考研] 328求调剂，英语六级551，有科研经历 +4 生物工程调剂 2026-03-16 12/600 2026-03-19 11:10 by 生物工程调剂
[考研] 一志愿天大材料与化工（085600）总分338 +5 蔡大美女 2026-03-13 5/250 2026-03-19 10:44 by 是小刘呀～
[考研] 304求调剂 +6 司空. 2026-03-18 6/300 2026-03-18 23:03 by 星空星月
[考研] 085601专硕，总分342求调剂，地区不限 +5 share_joy 2026-03-16 5/250 2026-03-18 14:48 by haxia
[考研] 0703化学求调剂 总分331 +3 ZY-05 2026-03-13 3/150 2026-03-18 10:58 by macy2011
[考研] 0703化学调剂 +3 妮妮ninicgb 2026-03-17 3/150 2026-03-18 10:29 by macy2011
[考研] 环境工程调剂 +8 大可digkids 2026-03-16 8/400 2026-03-18 09:36 by zhukairuo
[考研] 290求调剂 +3 p asserby. 2026-03-15 4/200 2026-03-17 16:35 by wangkm
[考博] 26申博 +4 八6八68 2026-03-16 4/200 2026-03-17 13:00 by 轻松不少随
[考研] 070303 总分349求调剂 +3 LJY9966 2026-03-15 5/250 2026-03-16 14:24 by xwxstudy
[考研] 22408总分284求调剂 +3 InAspic 2026-03-13 3/150 2026-03-15 11:10 by zhq0425
[考研] 085601材料工程315分求调剂 +3 yang_0104 2026-03-15 3/150 2026-03-15 10:58 by peike
[考研] 328求调剂 +3 5201314Lsy！ 2026-03-13 6/300 2026-03-14 15:31 by hyswxzs
[考研] 304求调剂 +7 7712b 2026-03-13 7/350 2026-03-13 21:42 by peike
[考研] 311求调剂 +3 冬十三 2026-03-13 3/150 2026-03-13 20:41 by JourneyLucky
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭