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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 实验/技术 » 大家做JM109/110的电转参数多少？
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foxcl

铁虫 (正式写手)

[交流] 大家做JM109/110的电转参数多少？ 已有5人参与

今天刚做2500v，25uF，200欧姆，2mm，不知道是电击杯的问题还是别的问题，直接爆火花了。 BIO-RAD仪器直接warning了，没有像往常一样显示结果。

大家说说有可能是什么原因吧

PS：1、电击杯擦干了
2、前天做GS115电转没有爆火花 1500v，25uF，200欧姆，2mm
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1楼 2012-06-28 23:10:09
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fenghan06

银虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
盐分太高了, 菌体多洗一次... DNA在纯化时候也多洗一次
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2楼2012-06-28 23:45:48
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microblue

银虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
另一种解决方法是减少所加质粒的量，就不会爆了。
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3楼2012-06-29 01:31:06
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fenghan06

银虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
是啊， 其实细菌也不用太多， 我现在不管做基因重组还是普通质粒， OD600 0.7的culture里面抽800uL用1毫升10%glycerol洗两次就好了...
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4楼2012-06-29 07:07:55
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ygyly

新虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
离子浓度高了吧，用核酸共沉剂处理一下再电转
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foxcl
5楼2012-06-29 10:40:22
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沙中清泉

木虫 (正式写手)
盐浓度太高！
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6楼2012-06-29 14:48:41
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foxcl

铁虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by fenghan06 at 2012-06-28 23:45:48
盐分太高了, 菌体多洗一次... DNA在纯化时候也多洗一次

直接连接产物电转的， 测了下连接产物浓度，大概150ng/ul，高的不可思议，测3次了都是这个范围左右。
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7楼2012-06-30 13:43:53
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foxcl

铁虫 (正式写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by microblue at 2012-06-29 01:31:06
另一种解决方法是减少所加质粒的量，就不会爆了。

可能是，3次测了质粒浓度，大概150ng/ul，直接电转了8ul
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8楼2012-06-30 13:44:34
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foxcl

铁虫 (正式写手)
引用回帖:
6楼: Originally posted by 沙中清泉 at 2012-06-29 14:48:41
盐浓度太高！

JM110是甘油冻存的，你指的是连接产物的盐浓度太高了吧？
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9楼2012-06-30 13:45:43
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foxcl

铁虫 (正式写手)
送鲜花一朵
引用回帖:
5楼: Originally posted by ygyly at 2012-06-29 10:40:22
离子浓度高了吧，用核酸共沉剂处理一下再电转

核酸共沉剂？
这个没做过，能不能指点下？用哪些试剂或试剂盒，谢谢中。
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10楼2012-06-30 13:46:20
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