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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 实验/技术 » 大家做JM109/110的电转参数多少？
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foxcl

铁虫 (正式写手)
引用回帖:
4楼: Originally posted by fenghan06 at 2012-06-29 07:07:55
是啊， 其实细菌也不用太多， 我现在不管做基因重组还是普通质粒， OD600 0.7的culture里面抽800uL用1毫升10%glycerol洗两次就好了...

呵呵，我是做完感受态直接甘油冻存的。下次试试你的这个方法。
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11楼2012-06-30 13:47:19
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沙中清泉

木虫 (正式写手)
引用回帖:
9楼: Originally posted by foxcl at 2012-06-30 13:45:43
JM110是甘油冻存的，你指的是连接产物的盐浓度太高了吧？...

是的
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12楼2012-07-01 09:22:08
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flemingo

金虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
基本就是前几位说的问题，电击杯爆主要是里面的液体离子太多电阻不够。这个又分感受态和你加的DNA，感受态要是买的基本合格，要是自己做的一定要充分洗干净；点击的DNA最好用H2O洗脱，如果是溶在TE里的，加的量别太大。
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13楼2012-07-01 15:05:08
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foxcl

铁虫 (正式写手)
引用回帖:
13楼: Originally posted by flemingo at 2012-07-01 15:05:08
基本就是前几位说的问题，电击杯爆主要是里面的液体离子太多电阻不够。这个又分感受态和你加的DNA，感受态要是买的基本合格，要是自己做的一定要充分洗干净；点击的DNA最好用H2O洗脱，如果是溶在TE里的，加的量别太 ...

感受态自己做的，应该充分洗干净了。
可是如果链接产物中离子浓度高，该怎么处理？
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14楼2012-07-01 23:06:52
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ygyly

新虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
好像是有试剂盒的，用到的试剂有 3M CH3COONa（PH5.2）， DNAmate， -20℃预冷的无水乙醇，-20℃的70%乙醇，你查一下吧，就叫核酸共沉剂。
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15楼2012-07-02 11:18:07
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ygyly

新虫 (初入文坛)
再问一下，怎么做质粒浓度的测定啊
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16楼2012-07-02 11:18:59
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foxcl

铁虫 (正式写手)
引用回帖:
16楼: Originally posted by ygyly at 2012-07-02 11:18:59
再问一下，怎么做质粒浓度的测定啊

微量分光光度计，只需1 ul就可以测。
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17楼2012-07-02 20:09:41
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