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foxcl

铁虫 (正式写手)

[交流] 大家做JM109/110的电转参数多少? 已有5人参与

今天刚做2500v,25uF,200欧姆,2mm,不知道是电击杯的问题还是别的问题,直接爆火花了。 BIO-RAD仪器直接warning了,没有像往常一样显示结果。

大家说说有可能是什么原因吧

PS:1、电击杯擦干了
2、前天做GS115电转没有爆火花 1500v,25uF,200欧姆,2mm
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fenghan06

银虫 (小有名气)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
盐分太高了, 菌体多洗一次... DNA在纯化时候也多洗一次
2楼2012-06-28 23:45:48
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microblue

银虫 (小有名气)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
另一种解决方法是减少所加质粒的量,就不会爆了。
3楼2012-06-29 01:31:06
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fenghan06

银虫 (小有名气)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
是啊, 其实细菌也不用太多, 我现在不管做基因重组还是普通质粒, OD600 0.7的culture里面抽800uL用1毫升10%glycerol洗两次就好了...
4楼2012-06-29 07:07:55
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ygyly

新虫 (初入文坛)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
离子浓度高了吧,用核酸共沉剂处理一下再电转

» 本帖已获得的红花(最新10朵)

5楼2012-06-29 10:40:22
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沙中清泉

木虫 (正式写手)

盐浓度太高!
6楼2012-06-29 14:48:41
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foxcl

铁虫 (正式写手)

引用回帖:
2楼: Originally posted by fenghan06 at 2012-06-28 23:45:48
盐分太高了, 菌体多洗一次... DNA在纯化时候也多洗一次

直接连接产物电转的, 测了下连接产物浓度,大概150ng/ul,高的不可思议,测3次了都是这个范围左右。
7楼2012-06-30 13:43:53
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foxcl

铁虫 (正式写手)

引用回帖:
3楼: Originally posted by microblue at 2012-06-29 01:31:06
另一种解决方法是减少所加质粒的量,就不会爆了。

可能是,3次测了质粒浓度,大概150ng/ul,直接电转了8ul
8楼2012-06-30 13:44:34
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foxcl

铁虫 (正式写手)

引用回帖:
6楼: Originally posted by 沙中清泉 at 2012-06-29 14:48:41
盐浓度太高!

JM110是甘油冻存的,你指的是连接产物的盐浓度太高了吧?
9楼2012-06-30 13:45:43
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foxcl

铁虫 (正式写手)

送鲜花一朵
引用回帖:
5楼: Originally posted by ygyly at 2012-06-29 10:40:22
离子浓度高了吧,用核酸共沉剂处理一下再电转

核酸共沉剂?
这个没做过,能不能指点下?用哪些试剂或试剂盒,谢谢中。
10楼2012-06-30 13:46:20
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