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foxcl

铁虫 (正式写手)

[交流] 大家做JM109/110的电转参数多少? 已有5人参与

今天刚做2500v,25uF,200欧姆,2mm,不知道是电击杯的问题还是别的问题,直接爆火花了。 BIO-RAD仪器直接warning了,没有像往常一样显示结果。

大家说说有可能是什么原因吧

PS:1、电击杯擦干了
2、前天做GS115电转没有爆火花 1500v,25uF,200欧姆,2mm
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foxcl

铁虫 (正式写手)

引用回帖:
13楼: Originally posted by flemingo at 2012-07-01 15:05:08
基本就是前几位说的问题,电击杯爆主要是里面的液体离子太多电阻不够。这个又分感受态和你加的DNA,感受态要是买的基本合格,要是自己做的一定要充分洗干净;点击的DNA最好用H2O洗脱,如果是溶在TE里的,加的量别太 ...

感受态自己做的,应该充分洗干净了。
可是如果链接产物中离子浓度高,该怎么处理?
14楼2012-07-01 23:06:52
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fenghan06

银虫 (小有名气)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
盐分太高了, 菌体多洗一次... DNA在纯化时候也多洗一次
2楼2012-06-28 23:45:48
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microblue

银虫 (小有名气)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
另一种解决方法是减少所加质粒的量,就不会爆了。
3楼2012-06-29 01:31:06
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fenghan06

银虫 (小有名气)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
是啊, 其实细菌也不用太多, 我现在不管做基因重组还是普通质粒, OD600 0.7的culture里面抽800uL用1毫升10%glycerol洗两次就好了...
4楼2012-06-29 07:07:55
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