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夜访吸血鬼wj

新虫 (初入文坛)

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[求助] SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳-关于电泳带的求助

SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳时，我们的1.5M和1.0M的Tris-Hcl配制了很久了（差不多有一年），酰胺也是。但是，电极缓冲液是新配的，请问对电泳有没有影响？下面是跑的电泳带
从左到右，1#，稀释5倍注样3μ加样品缓冲液7μ
1#，稀释5倍注样5μ加样品缓冲液5μ
1#，稀释10倍注样3μ加样品缓冲液7μ
1#，稀释10倍注样5μ加样品缓冲液5μ
2#，稀释5倍注样3μ加样品缓冲液7μ
2#，稀释5倍注样5μ加样品缓冲液5μ
样品缓冲液也不是新配的，有差不多几星期了。请问这样加缓冲液的量有问题吗？看带感觉没有样品似的，而且有个很明显的横线上什么原因？

电泳带

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1楼 2012-06-28 21:47:43

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生物小通

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【答案】应助回帖

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yqbter: 金币+2, 鼓励发帖 2012-07-01 17:03:01

第一建议Tris-HCl时间久了一定要调PH，要么冲配，酰胺建议重配，虽然胶没出问题，重配花不了多久的时间但可以防止出问题后郁闷的心情。
第二，用你的样品和水将5*上样buffer都处理成1*buffer，然后混匀煮沸5min再点样。
上样buffer在-20度应该没事，最底下那条横线没关系，跑胶过程中电流产热造成的干燥而已，正常现象。