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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳-关于电泳带的求助
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夜访吸血鬼wj

新虫 (初入文坛)

[求助] SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳-关于电泳带的求助

SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳时，我们的1.5M和1.0M的Tris-Hcl配制了很久了（差不多有一年），酰胺也是。但是，电极缓冲液是新配的，请问对电泳有没有影响？下面是跑的电泳带
从左到右，1#，稀释5倍注样3μ加样品缓冲液7μ
1#，稀释5倍注样5μ加样品缓冲液5μ
1#，稀释10倍注样3μ加样品缓冲液7μ
1#，稀释10倍注样5μ加样品缓冲液5μ
2#，稀释5倍注样3μ加样品缓冲液7μ
2#，稀释5倍注样5μ加样品缓冲液5μ
样品缓冲液也不是新配的，有差不多几星期了。请问这样加缓冲液的量有问题吗？看带感觉没有样品似的，而且有个很明显的横线上什么原因？

电泳带
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1楼 2012-06-28 21:47:43
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生物小通

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
yqbter: 金币+2, 鼓励发帖 2012-07-01 17:03:01
第一建议Tris-HCl时间久了一定要调PH，要么冲配，酰胺建议重配，虽然胶没出问题，重配花不了多久的时间但可以防止出问题后郁闷的心情。
第二，用你的样品和水将5*上样buffer都处理成1*buffer，然后混匀煮沸5min再点样。
上样buffer在-20度应该没事，最底下那条横线没关系，跑胶过程中电流产热造成的干燥而已，正常现象。
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学习，进步
2楼2012-06-29 09:14:44
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yylc1840

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
yqbter: 金币+2, 鼓励发帖 2012-07-01 17:03:18
很可能是SDS的原因，再就是电极缓冲液不用调ph,以前我们调了ph反而条带模糊，再就是SDS国产的也不行
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3楼2012-06-29 22:53:23
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kedaxiaoyu

木虫 (职业作家)

神虫浮云

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
Tris-HCl时间久了调好PH就行。还有你的样品煮过了吗？
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4楼2012-07-01 13:49:53
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夜访吸血鬼wj

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by kedaxiaoyu at 2012-07-01 13:49:53
Tris-HCl时间久了调好PH就行。还有你的样品煮过了吗？

样品煮过了....
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5楼2012-07-03 08:43:46
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冰风颤木

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

我们前几天也出现了同样的问题 一条横线 貌似的胶的制作问题吧 你可以试试重新做
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船到桥头自然直
6楼2012-07-14 15:44:23
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海王之心2751

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

Tris-Hcl和酰胺 放置太久了，应该重新配置。
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为梦想努力拼搏！
7楼2013-04-17 11:19:15
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小兵pp

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

点击缓冲液没问题吗？测一下电极缓冲液的pH看对不对
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8楼2013-04-17 12:54:03
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