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炎汐

新虫 (初入文坛)

[交流] 关于染核问题已有2人参与

请教各位大侠一下,我用Hoechst染核固定后的细胞,荧光为蓝色;一抗孵育4度过夜,二抗带有绿色FITC荧光;总共有六个皿,其中第二个皿蓝光绿光都没有,第三个第五个蓝光非常弱,弱到几乎看不见,绿光正常。不知道为什么?之前几次也是核染料染不上的情况,没出现过二抗不发光的现象,应该不可能是我混不匀,因为我用振荡器振过的。谁有经验的,或有什么想法的,告诉我吧,不胜感激。
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炎汐

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
6楼: Originally posted by 21102110 at 2012-07-03 09:10:50
33258主要是染死细胞
33342主要是用于活细胞染色

谢谢,我用的是染死细胞的。我又重做了一次,这一次,也是核染料,有的很清晰,有的很淡,还有一个现象是一个皿里面有一些染得很好,另一些很淡,难道是我没混匀吗?我在振荡器上震荡过的,加的量也是一样。
7楼2012-07-04 10:25:24
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21102110

铁杆木虫 (小有名气)

★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
yqbter: 金币+2, 很好的回答 2012-07-01 17:01:35
一抗1:100在4度过夜前在室温放置半小时,次日同样室温放置半小时后清洗,染二抗1:50 避光37度1h,hoechst 33258避光37度15min;另外Fitc淬灭很快,在封片的时候需要加抗淬灭剂

[ Last edited by 21102110 on 2012-6-29 at 09:57 ]
2楼2012-06-29 09:56:06
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silicare

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小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
你用的是33258还是33342?
3楼2012-07-02 10:10:38
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炎汐

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 21102110 at 2012-06-29 09:56:06
一抗1:100在4度过夜前在室温放置半小时,次日同样室温放置半小时后清洗,染二抗1:50 避光37度1h,hoechst 33258避光37度15min;另外Fitc淬灭很快,在封片的时候需要加抗淬灭剂
...

谢谢~
4楼2012-07-03 08:03:35
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