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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 关于染核问题
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炎汐

新虫 (初入文坛)

[交流] 关于染核问题 已有2人参与

请教各位大侠一下，我用Hoechst染核固定后的细胞，荧光为蓝色；一抗孵育4度过夜，二抗带有绿色FITC荧光；总共有六个皿，其中第二个皿蓝光绿光都没有，第三个第五个蓝光非常弱，弱到几乎看不见，绿光正常。不知道为什么？之前几次也是核染料染不上的情况，没出现过二抗不发光的现象，应该不可能是我混不匀，因为我用振荡器振过的。谁有经验的，或有什么想法的，告诉我吧，不胜感激。
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1楼 2012-06-28 18:53:07
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21102110

铁杆木虫 (小有名气)
★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
yqbter: 金币+2, 很好的回答 2012-07-01 17:01:35
一抗1：100在4度过夜前在室温放置半小时，次日同样室温放置半小时后清洗，染二抗1：50 避光37度1h，hoechst 33258避光37度15min；另外Fitc淬灭很快，在封片的时候需要加抗淬灭剂

[ Last edited by 21102110 on 2012-6-29 at 09:57 ]
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2楼2012-06-29 09:56:06
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silicare

荣誉版主 (文坛精英)

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优秀版主
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
你用的是33258还是33342？
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3楼2012-07-02 10:10:38
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炎汐

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 21102110 at 2012-06-29 09:56:06
一抗1：100在4度过夜前在室温放置半小时，次日同样室温放置半小时后清洗，染二抗1：50 避光37度1h，hoechst 33258避光37度15min；另外Fitc淬灭很快，在封片的时候需要加抗淬灭剂
...

谢谢~
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4楼2012-07-03 08:03:35
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炎汐

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by silicare at 2012-07-02 10:10:38
你用的是33258还是33342？

请问什么是33258和33342？不懂啊，请赐教
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5楼2012-07-03 08:04:45
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21102110

铁杆木虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
33258主要是染死细胞
33342主要是用于活细胞染色
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6楼2012-07-03 09:10:50
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炎汐

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
6楼: Originally posted by 21102110 at 2012-07-03 09:10:50
33258主要是染死细胞
33342主要是用于活细胞染色

谢谢，我用的是染死细胞的。我又重做了一次，这一次，也是核染料，有的很清晰，有的很淡，还有一个现象是一个皿里面有一些染得很好，另一些很淡，难道是我没混匀吗？我在振荡器上震荡过的，加的量也是一样。
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7楼2012-07-04 10:25:24
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