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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 实验/技术 » 发酵产物HPLC结果分析
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lgs1

木虫 (小有名气)

[求助] 发酵产物HPLC结果分析

最近做的一批发酵貌似终于有了目的产物，但是HPLC的结果图不是很会看，跑了两次目的峰的出峰时间基本一致，下面就是我的HPLC图谱，上图是我的标准品，出峰时间为12.895min，下图是样品，出峰时间是12.909min，样品的峰很低，我不知道这个峰能不能算是特征峰，这个面积应该是从基线开始算还是从峰的尖角开始算，请大家指点，谢谢

标准品



样品
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1楼 2012-06-27 20:39:51
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

czfscf

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
lgs1: 金币+1 2012-07-01 14:37:51
lgs1: 金币+1, ★有帮助 2012-07-01 14:38:05
小清新，如果你的发酵液密密麻麻的峰把整个时间轴的占满了，然后你用其中一个时间点的标准物去对，那当然回游一个峰重叠不是吗？我个人觉得你首先得先去下杂质，然后上液相看峰是不是都分开了，然后变化hplc条件，看你的峰和标准物是不是每次条件都能重叠，这样可能性就很大了！接着将该峰收集纯化（不纯化也行），然后去打个质谱，看分子量是不是相同，这样基本就差不多能确定了！祝你好运~~~
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Ecological Genomics；the scientific walking hormone
5楼2012-06-28 14:58:51
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hehongyu

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
lgs1: 金币+1, ★有帮助 2012-07-01 14:40:32
其实不纯化也可以，个人觉得先进个样品，然后往样品里面加入标准品，看看主峰出峰时间是否一致！
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7楼2012-06-29 11:09:21
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普通回帖

l68266152

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
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lgs1: 金币+2, ★★★很有帮助 2012-06-28 00:09:03
尖角开始算，看你这个图谱，建议你做下定量的萃取纯化再上HPLC，杂物质太多
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相信自己
2楼2012-06-27 21:33:07
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lgs1

木虫 (小有名气)
不能证明有产物吗，我这个就是发酵液直接浓缩上的HPLC，杂质肯定很多，但是我跑了两次这个峰都出现了，我觉得可能性挺大的，要真不是的话就是空欢喜一场了
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3楼2012-06-28 00:21:26
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ltx0744624

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
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lgs1: 金币+1, ★有帮助 2012-07-01 14:34:01
杂质太多了，时间都是指的峰顶的时间

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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解尔姆，朋至斯孚
4楼2012-06-28 07:30:06
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susizheng

木虫 (著名写手)

我們是糖 甜到憂傷

【答案】应助回帖

★
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lgs1: 金币+1, ★有帮助 2012-07-01 14:38:11
发酵液中的产物很复杂，出现和你产物相同的峰还说明不了问题，不信你做个control，不产你的目标产物的发酵液也做个HPLC看看。
总之，至少要做个液质才能说明问题。
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Thank-you，so-blue.
6楼2012-06-28 16:34:51
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redhongfei

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
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lgs1: 金币+1, ★有帮助 2012-07-01 14:41:42
将发酵产物离心后取上清液再上液相会好点 同时看你的标准品貌似基线都没跑平啊 另外上第一个样品和随后的几个会有点时间差异 建议楼主等基线跑平了上完标样和发酵样后再跑个标样时间基本就一致了
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热爱生物
8楼2012-06-29 15:52:46
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caojing801

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★
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lgs1: 金币+1, ★★★很有帮助 2012-07-01 14:40:19
1、你样品进液相时，应该是进了气泡，基线有很大的偏差，需要将基线走平后再进样。流动相需要30分钟超声除气，走基线时也要经常除气。
2、你样品进样前需要用三氯乙酸除蛋白。
3、标准品和样品进样时间不要间隔太久，温度对出峰时间有影响。
4、主峰出峰时间有少量的偏差是正常的。
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9楼2012-06-29 17:01:38
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lgs1

木虫 (小有名气)
引用回帖:
7楼: Originally posted by hehongyu at 2012-06-29 11:09:21
其实不纯化也可以，个人觉得先进个样品，然后往样品里面加入标准品，看看主峰出峰时间是否一致！

我也用过这个方法，不过梯度洗脱的条件还不是摸得很好，样品里面加入标准品以后所有的峰强度都加强了，结果不是很明显，不知道每个样品跑完以后是不是需要平衡一下？
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10楼2012-07-01 14:44:42
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