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feichen2008

银虫 (小有名气)

[交流] southern blot 酶切电泳 已有1人参与

这是我最近做的 southern blot 酶切电泳图,杂交最后没有带,是什么原因?酶切不完全,还是基因组提的不好?我用的是天根的提细菌基因组试剂盒提的基因组,提出来总是有点拖尾,怎么办?急,求各位虫友帮忙,万分感谢!
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feichen2008

银虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by yanshuai511 at 2012-06-27 20:23:48
不知道你做没做加probe的阳性对照,如果你的probe依然杂不出带的话,那就是你体系有问题。如果体系没问题的话,基因组的话10ug的量肯定是够了,不知道你要区分的条带是多大?跑胶的话如果有条件的话可以在冷库跑,这 ...

第二个泳道是质粒,杂交是有带的,说明探针没问题。我区分的条带大小大概有7000到8000bp左右,50微升体系,基因组量为5微克,酶切了大概一天半吧。我想知道,为什么样品杂不出带?很郁闷
3楼2012-06-28 20:53:54
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yanshuai511

铜虫 (小有名气)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
不知道你做没做加probe的阳性对照,如果你的probe依然杂不出带的话,那就是你体系有问题。如果体系没问题的话,基因组的话10ug的量肯定是够了,不知道你要区分的条带是多大?跑胶的话如果有条件的话可以在冷库跑,这样可以加大点儿电压,跑的时间短点儿。这样条带比较集中。
2楼2012-06-28 16:23:48
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