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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 请教做VEGF促进细胞增殖的实验的相关事情
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小雨莎莎

木虫 (正式写手)

[交流] 请教做VEGF促进细胞增殖的实验的相关事情 已有4人参与

最近一直都在用B16摸索VEGF促进增殖的浓度和药物抑制的浓度的实验，但是的出来的结果总是不好。
   我是用96孔板接种，每空接种约2500个细胞。然后培养约16-24h后用无血清培养基处理24h，然后加VEGF（用无血清DMEM培养基配制，每次都是现用现配），设置的浓度有200ng/ml，100ng/ml和50ng/ml，按照文献的说法是10ng/ml处理48h都能够有反应的，但是我用VEGF处理72h，中间不换液，然后用MTT检测，但是结果总是很不好，用无血清培养基处理的细胞作为对照，VEGF处理的有时候甚至比无血清的对照还要低，根本就看不出有什么变化。
   而且还有一个问题就是每次接种完，在换无血清培养基处理24h后细胞数量看起来还是比较正常的，但是经过72h培养后就明显看出同一个处理不同孔细胞的密度不一样，照理来说我接种的时候都是先配好适当的浓度而且反复混匀后才接种的，是不是这样也会影响检测结果？但是VEGF处理的不论是哪个处理都没有明显差别~哪位虫友能指点一下?谢谢！

[ Last edited by 小雨莎莎 on 2012-6-19 at 20:51 ]
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1楼 2012-06-19 20:48:21
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小雨莎莎

木虫 (正式写手)
哪位虫友做过类似实验啊？给个建议呗~
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2楼2012-06-20 09:54:01
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laokei

金虫 (正式写手)
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你试一下细胞和药物一起加呢，减少一步操作，细胞和药物都用无血清的。先将药物稀释好，加100ul，再加100ul你要种的细胞。换液过程中可能有细胞损失！
还有，你换换其它的显色的试一试，不用MTT。像progma的MTS或者CCK-8

[ Last edited by laokei on 2012-6-20 at 16:09 ]
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3楼2012-06-20 15:35:19
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小雨莎莎

木虫 (正式写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by laokei at 2012-06-20 15:35:19
你试一下细胞和药物一起加呢，减少一步操作，细胞和药物都用无血清的。先将药物稀释好，加100ul，再加100ul你要种的细胞。换液过程中可能有细胞损失！
还有，你换换其它的显色的试一试，不用MTT。像progma的MTS或者 ...

但是如果都用无血清的话细胞会不会无法贴壁啊？
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4楼2012-06-20 22:11:25
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laokei

金虫 (正式写手)
★
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也可以都用有血清的培养，加药的也一样，同时空白也要加血清，比较一下差别。细胞没有血清确实生长不好，如果后面都不加血清，细胞都长不好了，就谈不上有什么好的结果了！
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5楼2012-06-21 09:25:35
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小雨莎莎

木虫 (正式写手)
引用回帖:
5楼: Originally posted by laokei at 2012-06-21 09:25:35
也可以都用有血清的培养，加药的也一样，同时空白也要加血清，比较一下差别。细胞没有血清确实生长不好，如果后面都不加血清，细胞都长不好了，就谈不上有什么好的结果了！

我们老板说，用有血清的培养基的话VEGF的作用就体现不出来了~所以要用无血清的，我看了一下，别人做细胞因子的实验好像用的是无血清的~
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6楼2012-06-21 10:31:27
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laokei

金虫 (正式写手)
★
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你是不是用的脐带静脉内皮细胞？
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7楼2012-06-21 11:24:03
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小雨莎莎

木虫 (正式写手)
引用回帖:
7楼: Originally posted by laokei at 2012-06-21 11:24:03
你是不是用的脐带静脉内皮细胞？

B16，小鼠黑色素瘤细胞系。而且现在我想了一下，用人的VEGF来做这个实验，小鼠细胞的VEGFR2会响应么？
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8楼2012-06-21 13:51:36
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jiangyhai

金虫 (著名写手)
★
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是不是VEGF的质量不好？
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静心做事。
9楼2012-06-22 08:34:45
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小雨莎莎

木虫 (正式写手)
引用回帖:
9楼: Originally posted by jiangyhai at 2012-06-22 08:34:45
是不是VEGF的质量不好？

这个我就没法验证了~是中科物源买的~我师兄用这家公司别的细胞因子还是好的呀~
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10楼2012-06-24 13:55:17
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