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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » ELISA同一样品，稀释倍数越高，得到结果越大？为嘛？
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liushan09

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
8楼: Originally posted by liushan09 at 2012-06-24 14:01:25
初涉这个领域，很多东西都不太了解。还请多多赐教。先在此谢过~
1、关于理论血药浓度与我的稀释倍数：
实验采用ICR小鼠，给药剂量为5mg蛋白/kg体重，药液体积为100ul/20g体重，皮内注射。于注射后0.5h、1h、2h、 ...

1、标准品浓度稍做调整之后标准曲线见附图，之前从500ng/ml开始，现在的是从300ng/ml开始。标准曲线只是出现了S曲线的上半段，是不是意味着可以在将标准品浓度降低，尽量延长其线性区间？（现在的直线范围可视为0.03-0.1，或者0.03-0.13.）
2、样品的结果，见附图
选择OD值落在0.03-0.13之间的数据。这样结果可信么？
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11楼2012-06-24 15:01:28
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merryhan

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

引用回帖:
10楼: Originally posted by liushan09 at 2012-06-24 15:00:50
1、标准品浓度稍做调整之后标准曲线见附图，之前从500ng/ml开始，现在的是从300ng/ml开始。标准曲线只是出现了S曲线的上半段，是不是意味着可以在将标准品浓度降低，尽量延长其线性区间？（现在的直线范围可视为0. ...

1.你将标曲图纵坐标用线性，横坐标用log，这样得到的图是S形曲线。
2.你的标曲的OD值范围和定量范围分别是多少？看你的标曲图感觉准确度挺低的，应该测得的点基本都在标线上。
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12楼2012-06-26 13:39:05
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merryhan

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

引用回帖:
8楼: Originally posted by liushan09 at 2012-06-24 14:01:25
初涉这个领域，很多东西都不太了解。还请多多赐教。先在此谢过~
1、关于理论血药浓度与我的稀释倍数：
实验采用ICR小鼠，给药剂量为5mg蛋白/kg体重，药液体积为100ul/20g体重，皮内注射。于注射后0.5h、1h、2h、 ...

1.小鼠的理论血药浓度为：5mg/kg:58.5ml/kg再乘以F（生物利用度），58.5ml/kg是小鼠的血容量，得到0.08547×Fmg/ml就是小鼠体内的血药浓度。
2.你的实验一共就采集到48h，应该没有抗药性抗体产生。
3.HOOK效应你可以验证一下，方法：做10×ULOQ，100×ULOQ，1000×ULOQ,测定这几个浓度的OD值，如果随着浓度增大而OD降低就表明有HOOK效应。（ULOQ就是你的最高定量限）
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13楼2012-06-26 13:45:32
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liushan09

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
12楼: Originally posted by merryhan at 2012-06-26 13:39:05
1.你将标曲图纵坐标用线性，横坐标用log，这样得到的图是S形曲线。
2.你的标曲的OD值范围和定量范围分别是多少？看你的标曲图感觉准确度挺低的，应该测得的点基本都在标线上。...

昨天将标准品浓度范围扩大，做了标准曲线，横坐标用log，纵坐标用线性。
浓度设置、OD以及标准曲线如下：
1、常规S曲线是指以横坐标浓度用log，纵坐标OD用线性吗？我看我们这边软件上设置的相反的，横标准用的线性，纵坐标log了。哪种方式是对的呢？
2、做出来S曲线的线性范围可以视作300~18.75吗？
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14楼2012-06-28 08:21:00
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liushan09

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
12楼: Originally posted by merryhan at 2012-06-26 13:39:05
1.你将标曲图纵坐标用线性，横坐标用log，这样得到的图是S形曲线。
2.你的标曲的OD值范围和定量范围分别是多少？看你的标曲图感觉准确度挺低的，应该测得的点基本都在标线上。...

另将之前的数据采用横log纵线性处理了下，也是类似线性的关系。
但是，样品不同稀释倍数间数值存在差别这个问题还是存在。可能是稀释倍数的影响，或者是样品中血清的影响。
我现在做的消除血清干扰的方法：在标准品的稀释的过程中引入血清作为内标，比如20X稀释（这个稀释倍数尽量与样品的第一个稀释倍数相同），10STD+10血清+180稀释液，目的在于采用血清替换标准品溶液环境。后续稀释与标准品相同，采用倍比稀释。作为内标。结果处理：根据标准曲线拟合出的方程和内标的OD，给出内标的计算值。用计算值除以实值，得出一个系数。
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15楼2012-06-28 08:33:01
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liushan09

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
15楼: Originally posted by liushan09 at 2012-06-28 08:33:01
另将之前的数据采用横log纵线性处理了下，也是类似线性的关系。
但是，样品不同稀释倍数间数值存在差别这个问题还是存在。可能是稀释倍数的影响，或者是样品中血清的影响。
我现在做的消除血清干扰的方法：在标准 ...

刚才没打完，错点了回复。。
样品的计算值除以这个系数，作为最后的结果。
但是，内标不同稀释倍数间也是有差别的。如果标准曲线可靠的话，这是不是血清的影响呢？血清的影响该如何消除呢？
附图：内标与同板标准曲线（横log纵线性重新处理）。这个是之前的结果。
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16楼2012-06-28 08:39:43
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trif

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

你的试剂盒是用的夹心法，还是竞争法啊？竞争法的话这种情况很正常啊！
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大鬼
17楼2013-03-13 14:53:27
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