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taoziljt

金虫 (初入文坛)

[求助] elisa检测中结果不稳定 已有1人参与

使用间接elisa做出来的结果前后两天差别很大,具体的说是前两天做的是OD值1.5,ic50 0.3,转天在做就OD值0.2了,颜色上不去,换了所有的缓冲液 显色液还是颜色上不去,包被原也换了,不同包被原对比也做了,结果是不同的包被原颜色都浅,不同批次的抗体也同时做了对比,结果还是一样,现在找不出问题出现在哪,哪位大侠知道这是怎么回事啊?
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Linwenshi

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

1.可能温浴影响,96孔酶标板结构特别;易产生边缘效应,抗原抗体结合及酶促反应对温度有严格要求,酶标板周围与内部孔升降温速率不同,造成周边与内部孔结果差异;干浴与水浴存在明显的差异,尽可能使用水浴,并要求固相板放入水中,减少受热不均,贴密封膜,防止污物浸入。
2.冼涤是ELISA操作的重要环节,手冼条件一致性较差,对结果影响较大,半自动与全自动冼板机使用不当也会影响结果,血清中残留的的纤维蛋白丝或洗涤液析出的结晶易使洗板。
8楼2013-10-03 19:56:22
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xcx@12

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
寻梦五世: 金币+3, 欢迎新虫来医学版交流 2012-06-20 00:24:28
我也是个做ELISA的菜鸟,我想就你的问题提点看法,不知道合适否。首先我想你先确定你头一天OD1.5是做的复孔吗?如果是单孔做的话会不会是实验过程中板子“跳孔”所致?然后我想问问你有没有排除是二抗的原因,(但据我的认识一般一天不会降成这样的,)如果二抗浓度太低的话可能会降低的。
2楼2012-06-19 20:26:22
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taoziljt

金虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by xcx@12 at 2012-06-19 20:26:22
我也是个做ELISA的菜鸟,我想就你的问题提点看法,不知道合适否。首先我想你先确定你头一天OD1.5是做的复孔吗?如果是单孔做的话会不会是实验过程中板子“跳孔”所致?然后我想问问你有没有排除是二抗的原因,(但据 ...

做的是复孔,而且不止一天是这个值。也不是二抗的原因,现在就是时好时坏的,还没查到原因。
3楼2012-06-20 08:46:03
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zhangsh168

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

寻梦五世: 应助指数+1 2012-12-24 12:45:11
你所测定的物质 保存条件是否合理,效价是否降解
4楼2012-10-26 15:03:06
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