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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 医学 » 检验 » elisa检测中结果不稳定
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taoziljt

金虫 (初入文坛)

[求助] elisa检测中结果不稳定 已有1人参与

使用间接elisa做出来的结果前后两天差别很大，具体的说是前两天做的是OD值1.5，ic50 0.3，转天在做就OD值0.2了，颜色上不去，换了所有的缓冲液 显色液还是颜色上不去，包被原也换了，不同包被原对比也做了，结果是不同的包被原颜色都浅，不同批次的抗体也同时做了对比，结果还是一样，现在找不出问题出现在哪，哪位大侠知道这是怎么回事啊？
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1楼 2012-06-16 00:34:49
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Linwenshi

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

1.可能温浴影响，96孔酶标板结构特别；易产生边缘效应，抗原抗体结合及酶促反应对温度有严格要求，酶标板周围与内部孔升降温速率不同，造成周边与内部孔结果差异；干浴与水浴存在明显的差异，尽可能使用水浴，并要求固相板放入水中，减少受热不均，贴密封膜，防止污物浸入。
2.冼涤是ELISA操作的重要环节，手冼条件一致性较差，对结果影响较大，半自动与全自动冼板机使用不当也会影响结果，血清中残留的的纤维蛋白丝或洗涤液析出的结晶易使洗板。
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8楼2013-10-03 19:56:22
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xcx@12

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
寻梦五世: 金币+3, 欢迎新虫来医学版交流 2012-06-20 00:24:28
我也是个做ELISA的菜鸟，我想就你的问题提点看法，不知道合适否。首先我想你先确定你头一天OD1.5是做的复孔吗？如果是单孔做的话会不会是实验过程中板子“跳孔”所致？然后我想问问你有没有排除是二抗的原因，（但据我的认识一般一天不会降成这样的，）如果二抗浓度太低的话可能会降低的。
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2楼2012-06-19 20:26:22
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taoziljt

金虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by xcx@12 at 2012-06-19 20:26:22
我也是个做ELISA的菜鸟，我想就你的问题提点看法，不知道合适否。首先我想你先确定你头一天OD1.5是做的复孔吗？如果是单孔做的话会不会是实验过程中板子“跳孔”所致？然后我想问问你有没有排除是二抗的原因，（但据 ...

做的是复孔，而且不止一天是这个值。也不是二抗的原因，现在就是时好时坏的，还没查到原因。
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3楼2012-06-20 08:46:03
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zhangsh168

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

寻梦五世: 应助指数+1 2012-12-24 12:45:11
你所测定的物质 保存条件是否合理，效价是否降解
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4楼2012-10-26 15:03:06
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