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taoziljt

金虫 (初入文坛)

[求助] elisa检测中结果不稳定 已有1人参与

使用间接elisa做出来的结果前后两天差别很大,具体的说是前两天做的是OD值1.5,ic50 0.3,转天在做就OD值0.2了,颜色上不去,换了所有的缓冲液 显色液还是颜色上不去,包被原也换了,不同包被原对比也做了,结果是不同的包被原颜色都浅,不同批次的抗体也同时做了对比,结果还是一样,现在找不出问题出现在哪,哪位大侠知道这是怎么回事啊?
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Linwenshi

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

1.可能温浴影响,96孔酶标板结构特别;易产生边缘效应,抗原抗体结合及酶促反应对温度有严格要求,酶标板周围与内部孔升降温速率不同,造成周边与内部孔结果差异;干浴与水浴存在明显的差异,尽可能使用水浴,并要求固相板放入水中,减少受热不均,贴密封膜,防止污物浸入。
2.冼涤是ELISA操作的重要环节,手冼条件一致性较差,对结果影响较大,半自动与全自动冼板机使用不当也会影响结果,血清中残留的的纤维蛋白丝或洗涤液析出的结晶易使洗板。
8楼2013-10-03 19:56:22
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