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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 实验/技术 » 有没有用荧光探针测定细菌细胞ROS，求实验方法。。新手。谢谢
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shunzhifulin

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
laozuzunzhe: 金币+1, 鼓励应助！ 2012-12-21 16:25:03
我现在也在测，仅用探针或是荧光分光光度计是不行的，要结合起来，探针只是发生反应，反应结果还需借助荧光分光光度计等仪器来检测，我只知道用荧光分光光度计的方法流式细胞仪不会用
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11楼2012-11-18 17:26:32
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hellolin

金虫 (小有名气)
引用回帖:
11楼: Originally posted by shunzhifulin at 2012-11-18 17:26:32
我现在也在测，仅用探针或是荧光分光光度计是不行的，要结合起来，探针只是发生反应，反应结果还需借助荧光分光光度计等仪器来检测，我只知道用荧光分光光度计的方法流式细胞仪不会用

你好，不知道你现在做的结果怎么样了。我最近也在用荧光酶标仪测细胞的ROS。不知道你用的是哪种酶标板测的?是直接用的细胞培养的哪种透明板还是其他版？还有就是定量的问题，因为在洗细胞的时候会洗掉一部分细胞，这对测定结果会产生一定影响，不知道你是怎么处理的。谢谢
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scienceguy
12楼2012-12-21 09:43:02
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shunzhifulin

金虫 (小有名气)
引用回帖:
12楼: Originally posted by hellolin at 2012-12-21 09:43:02
你好，不知道你现在做的结果怎么样了。我最近也在用荧光酶标仪测细胞的ROS。不知道你用的是哪种酶标板测的?是直接用的细胞培养的哪种透明板还是其他版？还有就是定量的问题，因为在洗细胞的时候会洗掉一部分细胞， ...

我用的是荧光分光光度计，对酶标仪的问题我也不了解。
你的第二个问题，试剂说明书上说DCF（产生荧光的物质）不透过细胞膜，我试验后发现，是不正确的。也就是说，你说的洗细胞的时候会洗掉一部分细胞，其实是洗掉了在上清中的DCF。这对结果的影响是很大的，我也没确定最终的定量方法。初步考虑不洗细胞，直接测。
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13楼2012-12-22 12:11:23
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kk26

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

引用回帖:
12楼: Originally posted by hellolin at 2012-12-21 09:43:02
你好，不知道你现在做的结果怎么样了。我最近也在用荧光酶标仪测细胞的ROS。不知道你用的是哪种酶标板测的?是直接用的细胞培养的哪种透明板还是其他版？还有就是定量的问题，因为在洗细胞的时候会洗掉一部分细胞， ...

测定荧光的板必须是黑色的
透明板会由于光照造成荧光的淬灭
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坚持的保持一种热爱！
14楼2012-12-25 08:44:39
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hellolin

金虫 (小有名气)
引用回帖:
14楼: Originally posted by kk26 at 2012-12-25 08:44:39
测定荧光的板必须是黑色的
透明板会由于光照造成荧光的淬灭...

是否是那种底部透明的，边上黑色的那种板？
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scienceguy
15楼2012-12-27 09:49:01
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kk26

木虫 (小有名气)
引用回帖:
15楼: Originally posted by hellolin at 2012-12-27 09:49:01
是否是那种底部透明的，边上黑色的那种板？...

全黑
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坚持的保持一种热爱！
16楼2012-12-28 08:45:14
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JNVBNC

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

如果该探针有确定的吸收波长和发射波长，就可以用相应的荧光仪器来检测，如共聚焦显微镜和流式细胞仪。CLSM的优点是比较直观，FCM的优点是便于定量。
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17楼2013-12-12 15:20:34
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threeliu1

银虫 (小有名气)
您好，我也要做类似实验，请问这个实验最后用什么检测的，纳米胁迫了多久，谢谢，望尽快恢复，实验捉急
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18楼2015-03-11 13:51:29
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酸奶一号

银虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by starseacow at 2012-06-15 17:53:23
没做过细菌的。不过一般在装载探针后，在荧光显微镜或激光共聚焦显微镜下观察拍照，可以直观看到ROS迸发，通过对图像处理可以获得定量结果。

不知道前辈做过真菌曲霉菌丝细胞中ROS的测定没，同样是用DCFH-DA探针孵育，然后通过光纤探针检测，谢谢
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DNA-RNA-dsRNA-ssRNA-cDNAs
19楼2015-04-07 21:19:10
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mishiyongqi

新虫 (正式写手)
引用回帖:
15楼: Originally posted by hellolin at 2012-12-27 09:49:01
是否是那种底部透明的，边上黑色的那种板？...

您好 我想要这种培养板 但是实验室之前没有人用过，您能提供下信息么？
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20楼2015-04-16 16:38:26
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