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jemmy505210

银虫 (小有名气)

[求助] 有没有用荧光探针测定细菌细胞ROS,求实验方法。。新手。谢谢 已有4人参与

我想用H2DCFDA探针测定纳米材料对细菌细胞内ROS含量测定。。

是不是用荧光分光光度计

具体操作应该怎么做

谢谢
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JNVBNC

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

如果该探针有确定的吸收波长和发射波长,就可以用相应的荧光仪器来检测,如共聚焦显微镜和流式细胞仪。CLSM的优点是比较直观,FCM的优点是便于定量。
17楼2013-12-12 15:20:34
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starseacow

专家顾问 (职业作家)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
没做过细菌的。不过一般在装载探针后,在荧光显微镜或激光共聚焦显微镜下观察拍照,可以直观看到ROS迸发,通过对图像处理可以获得定量结果。
植物生理群69993869,为避免广告,申请加入请提供木虫昵称,院校及专业信息
2楼2012-06-15 17:53:23
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starseacow

专家顾问 (职业作家)

H2DCFDA
Ex/Em: ~492–495/517–527 nm
密封干燥保存,现用现配,使用时溶于DMSO,工作浓度在1-10 微摩尔,一般1微摩尔就够,细胞处理时间大约30 min。
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3楼2012-06-15 18:00:51
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张俊亚

木虫 (正式写手)

好高深,没玩过!
4楼2012-06-16 11:46:49
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