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jemmy505210

银虫 (小有名气)

[求助] 有没有用荧光探针测定细菌细胞ROS,求实验方法。。新手。谢谢 已有4人参与

我想用H2DCFDA探针测定纳米材料对细菌细胞内ROS含量测定。。

是不是用荧光分光光度计

具体操作应该怎么做

谢谢
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shunzhifulin

金虫 (小有名气)

引用回帖:
12楼: Originally posted by hellolin at 2012-12-21 09:43:02
你好,不知道你现在做的结果怎么样了。我最近也在用荧光酶标仪测细胞的ROS。不知道你用的是哪种酶标板测的?是直接用的细胞培养的哪种透明板还是其他版?还有就是定量的问题,因为在洗细胞的时候会洗掉一部分细胞, ...

我用的是荧光分光光度计,对酶标仪的问题我也不了解。
你的第二个问题,试剂说明书上说DCF(产生荧光的物质)不透过细胞膜,我试验后发现,是不正确的。也就是说,你说的洗细胞的时候会洗掉一部分细胞,其实是洗掉了在上清中的DCF。这对结果的影响是很大的,我也没确定最终的定量方法。初步考虑不洗细胞,直接测。
13楼2012-12-22 12:11:23
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starseacow

专家顾问 (职业作家)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
没做过细菌的。不过一般在装载探针后,在荧光显微镜或激光共聚焦显微镜下观察拍照,可以直观看到ROS迸发,通过对图像处理可以获得定量结果。
植物生理群69993869,为避免广告,申请加入请提供木虫昵称,院校及专业信息
2楼2012-06-15 17:53:23
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starseacow

专家顾问 (职业作家)

H2DCFDA
Ex/Em: ~492–495/517–527 nm
密封干燥保存,现用现配,使用时溶于DMSO,工作浓度在1-10 微摩尔,一般1微摩尔就够,细胞处理时间大约30 min。
植物生理群69993869,为避免广告,申请加入请提供木虫昵称,院校及专业信息
3楼2012-06-15 18:00:51
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张俊亚

木虫 (正式写手)

好高深,没玩过!
4楼2012-06-16 11:46:49
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