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长鑫

木虫 (正式写手)

[求助] 青霉原生质体的制备

各位虫友,小虫来求助,新的一章实验就要准备开始了,没有做过原生质体,看了不少帖子和一些文献,但是发现还是有一些疑惑需要大家帮忙,呵呵,非常感谢!

1. 我做的是皮壳青霉,看了很多关于青霉原生质体的制备的文章,跟我的菌株不同,不知道应该参见什么具体的条件,如采用什么裂解酶(蜗牛酶,纤维素酶,溶壁酶)。文献中有些是自己配比摸索的2种或3种酶的混合裂解酶,但是我目前不打算从混合酶配比方面开始做,当然经费也有限,有没有直接卖效果较好的混合酶呢?如有,麻烦各位虫友推荐一下,并提供购买的厂家和联系方式,呵呵

2.制备原生质体需要考虑菌体的培养时间,有人建议做一下生长曲线,我的菌株之前做过生长曲线,48h达到对数末期和稳定期,那我应该选用预培养多长时间的菌体呢?24h?

3.提供你们认为的关于该实验的经验教训,嘿嘿,金币金币不限量供应啊!人们说站在巨人的肩膀上看的远,我亲爱的虫友们,你们就是我坚强的臂膀啊!
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克隆大虾

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与,应助指数 +1
长鑫: 金币+1, ★有帮助 2012-06-11 12:51:36
裂解酶用sigma的lysoenzyme不错...菌体培养24小时足够...
2楼2012-06-11 03:40:19
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plumplumgxc

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
长鑫: 金币+2, ★有帮助, 我昨天已经联系了,好像是一种通用型的,跟进口的Novozyme234效果一致,谢谢你 2012-06-11 12:52:36
要是经费有限,就用国产的溶壁酶和蜗牛酶。原来广东微生物所有一种酶不错。
科研这条道不好走啊。。。
3楼2012-06-11 08:47:37
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长鑫

木虫 (正式写手)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 克隆大虾 at 2012-06-11 03:40:19
裂解酶用sigma的lysoenzyme不错...菌体培养24小时足够...

谢谢
4楼2012-06-11 12:51:27
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