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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 亲和层析柱重生问题
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zhougama

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Ni柱再生方法

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1楼 2012-06-05 21:23:44
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wintersand

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
zhougama: 金币+15, ★★★很有帮助, 非常感谢你的回答，受益匪浅！ 2012-06-08 19:29:11
不需要每次都重生柱子，可以用一段时间以后再重生。如果担心柱子不干净，可以每次用0.1M的氢氧化钠或者含有500mM咪唑的8M尿素洗两个柱体积就好了，不过洗完后一定要用水冲干净，不然下次用的时候蛋白就变性了。
至于蛋白和咪唑同Ni离子的亲和力问题我是这样认为的，蛋白上具有6个咪唑基团能与Ni 离子结合，因此会比单个的咪唑分子结合得更强，buffer洗不下来蛋白却能洗下咪唑；而咪唑能把蛋白竞争下来是靠浓度来实现的，只有较高浓度的咪唑才能把Ni离子全部抢过来。
赞一下(1人) 回复此楼
8楼2012-06-08 11:31:49
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danbomingyue

禁虫 (正式写手)
★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
zhougama: 金币+5, ★有帮助 2012-06-07 08:41:43
本帖内容被屏蔽
2楼2012-06-06 08:51:48
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danbomingyue

禁虫 (正式写手)
本帖内容被屏蔽
3楼2012-06-06 08:52:35
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ghost202

铜虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
silicare: 金币+2, 谢谢参与 2012-06-06 15:11:08
zhougama: 金币+10, ★★★很有帮助 2012-06-07 08:41:26
这个问题很简单的，不需要将咪唑完全洗下来。只需要下次用的时候用binding buffer平衡一下就可以了。你要明确蛋白纯化的原理，当咪唑浓度低的时候，蛋白的竞争能力是会比咪唑强的。
赞一下(2人) 回复此楼
4楼2012-06-06 11:54:22
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