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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 亲和层析柱重生问题
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zhougama

禁虫 (正式写手)
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1楼2012-06-05 21:23:44
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dshlove

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
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silicare: 金币+8, BioEPI+1, 应助指数+1, 鼓励发帖交流 2012-06-06 15:10:24
你的问题我们以前也讨论过。
就是咪唑能洗下蛋白，buffer能洗下咪唑，但是buffer不能洗下蛋白的问题。
要记住一点，这理论是完全没有问题的。所以柱子并不是每次都要重生。至于为什么这样，我问过我们这边的一个负责人，他说这是各种结合方式和作用力不同的结果。
要明白，免疫亲和机理导致互相结合，不是一种力的作用结果，是多种力共同作用的，可能会存在范德华力，氢键之类的。分析一种结合方式和另外一种结合方式之间谁强谁弱，是要看起主导作用的力的大小。
大家都知道，蛋白上标签和金属Ni以免疫亲和机理结合，而咪唑的咪唑环与金属Ni的结合能力比HIS标签结合能力强，但是他们作用力不一样。具体我不知道是什么力，我不能乱说。就比如说，后者氢键结合能力比前者范德华力结合能力强所以前者就被挤下来了，但是，buffer的其他的作用力比咪唑强，就能洗下咪唑，但是buffer的综合作用力比不上蛋白的结合能力，所以没法被洗脱。
我知道的大概就这么多，希望你能理解我的意思。
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6楼2012-06-06 14:50:46
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danbomingyue

禁虫 (正式写手)
★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
zhougama: 金币+5, ★有帮助 2012-06-07 08:41:43
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2楼2012-06-06 08:51:48
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danbomingyue

禁虫 (正式写手)
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3楼2012-06-06 08:52:35
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ghost202

铜虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
silicare: 金币+2, 谢谢参与 2012-06-06 15:11:08
zhougama: 金币+10, ★★★很有帮助 2012-06-07 08:41:26
这个问题很简单的，不需要将咪唑完全洗下来。只需要下次用的时候用binding buffer平衡一下就可以了。你要明确蛋白纯化的原理，当咪唑浓度低的时候，蛋白的竞争能力是会比咪唑强的。
赞一下(2人) 回复此楼
4楼2012-06-06 11:54:22
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