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芥末猫

银虫 (小有名气)

应助: 0 (幼儿园)
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虫号: 1552310
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专业: 水产生物遗传育种学

[求助] 原核表达载体构建，测序不成功

郁闷死了，构建原核表达载体，提质粒电泳检测是大于两千，又用目的基因的引物做pcr检测，条带正确，然后送测序，告诉我可能是空载。。。。。。。
要是空载的话我pcr还能有目的条带吗？这个构建了好久了，一直没成功，快疯了

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1楼 2012-06-05 18:49:02

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短耳朵喵

新虫 (初入文坛)

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性别: MM
专业: 生殖生物学

引用回帖:

17楼: Originally posted by merryyiyi at 2012-09-07 09:58:13
同意11楼的建议，从测序峰图来看，是信号杂，可能的原因是质粒浓度低。如果是用您PCR扩增引物进行测序的话，还可能存在引物不适合测序的情况。此外，如果您的质粒存在复杂结构，或者是GCrich等特殊情况，那么测序也 ...

那怎样才能减少空载体的比率呢？应该在连接的时候提高PCR产物的浓度吗？