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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 原核表达载体构建，测序不成功
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芥末猫

银虫 (小有名气)

[求助] 原核表达载体构建，测序不成功

郁闷死了，构建原核表达载体，提质粒电泳检测是大于两千，又用目的基因的引物做pcr检测，条带正确，然后送测序，告诉我可能是空载。。。。。。。
要是空载的话我pcr还能有目的条带吗？这个构建了好久了，一直没成功，快疯了
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1楼 2012-06-05 18:49:02
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huguangdong

至尊木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★
小丹木木: 金币+2, 鼓励应助 2012-09-07 13:39:34
PCR检测是不靠谱的，原核表达载体一般都是用酶切鉴定来检测的，如果酶切鉴定不正确也就没必要送测序，另外考虑到原核表达载体拷贝数低的问题，提质粒要多收菌，酶切鉴定也要根据浓度多加一点。
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18楼2012-09-07 10:13:47
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芥末猫

银虫 (小有名气)
这里还有张测序失败的图片，懂的给看看吧，谢谢啊
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2楼2012-06-05 18:55:49
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504775490

金虫 (知名作家)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
小丹木木: 金币+2, 鼓励交流 2012-06-06 13:46:35
这张测序图谱确实不怎么好，按楼主的说法应该是构建成功了，你可以送个菌液给公司，或者是换一家公司。我前几天也送质粒去测序了，也说有两个样测序失败，不过这个公司给返工重测了，结果测出来了，也有可能是公司的问题！我是跟诺塞测的序，他家服务不错，仅供参考！
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3楼2012-06-05 20:41:23
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lanjb1013

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
如果，经常构建的话，建议你用载体的通用引物检测。
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4楼2012-06-05 23:27:36
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