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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » WB显影结果分子量漂移
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sunxiao1987

新虫 (初入文坛)

[交流] WB显影结果分子量漂移

我是做WB的新手，电泳条件是分离胶12%，浓缩胶5%，30mA浓缩胶90min,40mA分离胶60min,250mA转膜120min，我的目的蛋白孵育抗体时一抗是1:100二抗1:2000，感觉时双条带，不知道为什么？
内参的话一抗1:2000二抗1:2000，总是连在一起分不开，该怎么办？
目的蛋白正确的分子量是82KD，，但是我所做出来的条带分子量对不上、偏小不到70KD，我的蛋白含有两个磷酸化的位点，会不会是这个原因？求高手指教啊。

目的蛋白      一抗1:100  二抗1:2000



内参  一抗1:2000，二抗1:2000
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1楼 2012-05-29 22:12:45
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sunxiao1987

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
13楼: Originally posted by caoluoyuan at 2012-05-31 10:57:16
应该是磷酸化的问题

我查了下裂解液的说明书，说明书里谁裂解液里有加磷酸酶抑制剂，还有就是我师姐跟我用一样的裂解液一样的抗体做细胞，目的蛋白的分子量是对的，着又怎么解释呢？
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14楼2012-05-31 14:50:00
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userhung

禁虫 (文学泰斗)
★
sunxiao1987(金币+1): 谢谢参与
应该是这个原因~~~~~~~~~~~~~~
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2楼2012-05-29 23:00:11
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aixia5

金虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
你做的是变性胶还是非变性胶？
赞一下 回复此楼
10楼2012-05-30 09:23:00
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sunxiao1987

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
10楼: Originally posted by aixia5 at 2012-05-30 09:23:00
你做的是变性胶还是非变性胶？

我做的是变性凝胶
赞一下 回复此楼
12楼2012-05-31 08:57:30
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