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TSRCD

木虫 (正式写手)

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[交流] 做药动时遇到的一些问题

我最近在做一个生物碱的药动，其生物利用度差，国外（印度）报道其最大血药（血清）浓度为2µg/ml。我在做回收率考察实验中也是按照这个浓度进行，回收率达到了75%，满足检测要求。而我在单倍剂量（与国外那篇文献相同）时，未检测出目标物，增大为三倍剂量时也未检出目标物。可能的原因如下，望高人指点：
1、大鼠年龄较大。这批大鼠是前一个实验剩下的，约有16周龄。
2、血清放置时间问题。三倍剂量灌胃后取血的这批血清放了有20天。
3、灌胃溶剂问题：该生物碱不溶于水，国外那边文献是将其溶于花生油中灌胃，我是将其混悬于0.5%CMC-Na（上一届做药效实验时是用的该溶剂）灌胃。不知其是否为检测不出的决定性原因。

同时，在实验过程中也发现了一个很奇怪的峰，暂称其为内源性峰，具体情况如下：
样品的处理过程：1ml血清+5ml萃取溶剂（丙酮：乙酸乙酯=2:3），涡旋1min, 取上清氮气吹干，150µl甲醇复溶，-20度冻2h，10000转10min，装进样瓶测定。
现象：实验过程中，在-20度冻存后，每次拿出几个离心进样，每次的头一个样未出现内源性峰，后面的就全部都有；
      该峰在每个样中峰面积都较大，且封面积稳定，峰宽约2min（目标物<1min），保留时间逐渐缩短，连续进10个样，其保留时间可以逐渐缩短1.5min(回收率实验时也有，该生物碱的峰保留时间没有变化)。通过调整流动相比例，可以不影响我的测定；
      我所使用的是二极管阵列检测器，每次都采集了3D图谱，可以看见其200-400nm的特征吸收峰，奇怪的是发现该内源性成分与目标物的特征吸收峰很相似，199、225处的特征吸收峰仅相差1nm，检测波长处的吸收峰也只相差6nm。
      最开始看了特征吸收峰我以为是样品处理过程中目标物结构发生改变，但考虑到其保留时间在目标物保留时间稳定的情况下不稳定，峰也较宽（2min），峰面积也较稳定，个人觉得其就是个杂峰，不知各位有何高见。
   现在关键问题是灌胃后的血样中检测不出目标物，各位有何高招？

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1楼 2012-05-29 11:27:11

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cj22xmc

新虫 (正式写手)

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引用回帖:

2楼: Originally posted by liuyuanzuo at 2012-05-30 09:21:27
溶解之后，吸收会好一些的，而且，国外的文献用的是液相吗，如果别人是质谱检测的，你用DAD测不到也正常。关于你那个内源峰的问题，我只是随便说下我们以前遇到的问题，希望对你有帮助吧。我们用乙酸乙酯提取血浆样 ...

如果是乙酸乙酯里面的东西，为什么前面10针没有，不懂。

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10楼2012-05-31 07:50:25

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liuyuanzuo

金虫 (小有名气)

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★ ★ ★ ★ ★
TSRCD(金币+1): 谢谢参与
TSRCD: 金币+3 2012-05-30 15:03:20
TSRCD: 金币+1, 那个内源性峰是上一针的残留，目标物10钟出峰，内源性峰26分钟才出来，太靠后了。空白也有，估计也是试剂问题，或者该提取试剂本身就会将血浆中的那个内源性物质提取出来 2012-06-06 10:10:18

溶解之后，吸收会好一些的，而且，国外的文献用的是液相吗，如果别人是质谱检测的，你用DAD测不到也正常。关于你那个内源峰的问题，我只是随便说下我们以前遇到的问题，希望对你有帮助吧。我们用乙酸乙酯提取血浆样品是，前10针没有出现怪峰，到10针以后每次都出现，时间，峰面积都一样的，我们最后确定其是乙酸乙酯里的东西。我个人认为，老鼠的吸收能力要比新鼠强

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2楼2012-05-30 09:21:27

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