24小时热门版块排行榜    

查看: 2809  |  回复: 23
本帖产生 1 个 BioEPI ,点击这里进行查看
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

jixiao_02

铜虫 (小有名气)

[求助] 希望高人指点迷津,关于蛋白质葡聚糖凝胶过柱问题

我过凝胶柱过了好几遍了,用的是G-25葡聚糖凝胶柱,蛋白质应该先被洗脱下来,可是我每次过柱子,用280nm下测蛋白质吸光度,可是测出的结果是蛋白质在后边洗脱下来,而且没有明显的差别,洗脱的每一瓶里都有一定量的蛋白质,我是不是过柱子时出现了什么问题,或者装柱子时出现了问题,问什么结果会这样?希望有高人指点一下,我现在是极度的需要解答!
最近看了一些信息,凝胶必须经过脱气处理,否则柱效会很差,我没有经过脱气处理,溶胀之后直接装柱了,这个会对实验结果有什么影响啊?

[ Last edited by jixiao_02 on 2012-5-29 at 11:07 ]
回复此楼
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

jixiao_02

铜虫 (小有名气)

引用回帖:
4楼: Originally posted by danbomingyue at 2012-05-29 15:03:25
第一,你应该检查一下,你的装柱,装胶后有没有压实,即用蠕动泵按照>上样洗脱流速进行压柱,将填料压均匀。否则,柱效不好。
第二,你的样品浓度是不是很稀?上样体积是不是过大?
第三,至于溶胀,没有很大的关 ...

真的是非常感谢,但是我并没有蠕动泵,全靠重力的作用平衡柱子,怎样的柱子才算是压均匀了,这个不太懂唉,能不能再给说详细点。不好意思,我刚接触这个实验,好多不太明白。还有就是我上样的蛋白质的浓度是20mg/ml,这个浓度不是很低吧,如果浓度太高会对结果有影响吗?蛋白质上样浓度在什么范围比较好啊?每次上样体积大约是1ml,上样体积大吗?感谢您!
5楼2012-05-29 16:09:09
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 24 个回答

dshlove

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
amisking: 金币+4, 鼓励发帖帮助解答问题。 2012-05-29 20:04:56
据我个人看,你这有几方面问题,你去逐一检查。
首先,柱子有个分离的范围,分子量越大,越好分离。反而分子量小的,可能会和小分子一起下来。同时上样体积尽量小,在浓缩时候不沉淀为准。
其次,装柱要压实。同时如果你没有脱气处理的话,可以先用水冲洗至少1.2个柱体积再换上buffer,最后上样。
最后,针对你出现的问题,洗脱中每一瓶都有蛋白,我觉得装柱时候可能凝胶破损了,以至于蛋白从开始就一直流穿直到最后。
希望能帮到你。
2楼2012-05-29 12:29:59
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lihuan0525

金虫 (职业作家)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
jixiao_02: 金币+1, ★★★很有帮助 2012-05-29 16:09:32
楼主是怎么溶胀的,是用热水还是用的冷水,溶胀的时间多长
3楼2012-05-29 13:52:48
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

danbomingyue

禁虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
amisking: 金币+3, BioEPI+1, 鼓励发帖交流问题。 2012-05-29 20:05:07
第一,你应该检查一下,你的装柱,装胶后有没有压实,即用蠕动泵按照>上样洗脱流速进行压柱,将填料压均匀。否则,柱效不好。
第二,你的样品浓度是不是很稀?上样体积是不是过大?
第三,至于溶胀,没有很大的关系,一般用常温纯水即可,溶胀时间24h;
第四,装胶的时候,一定不能分段添加,要将填料一次性添加进去,然后用蠕动泵或其他的动力装置用水压实。
4楼2012-05-29 15:03:25
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 29号明天会评吗 +4 笨笨唐 2026-08-28 4/200 2026-08-31 09:30 by huixian257
[文学芳草园] 梦想 +4 myrtle 2026-08-26 4/200 2026-08-31 08:43 by 逸域隐帆
[基金申请] 中青基了要发朋友圈吗? +6 349506619 2026-08-28 6/300 2026-08-31 08:43 by kingkocxr
[基金申请] 基金不中,共勉 +12 eulota 2026-08-26 12/600 2026-08-31 08:42 by ZJTJZ
[基金申请] 投票:  有多少人是今天查系统知道结果的? +17 爱看书的可乐 2026-08-26 19/950 2026-08-31 08:28 by xiangy672
[基金申请] 有没有仍没收到信息的 +7 德尚中行 2026-08-27 8/400 2026-08-30 20:52 by purplejack
[考博] 找导师 +6 yuanjiabao 2026-08-29 7/350 2026-08-30 14:40 by 生科新手
[基金申请] 麻烦专家们看看评委们的意见(F口面上) +6 gdd2018 2026-08-28 11/550 2026-08-30 08:58 by 超级无敌华子
[基金申请] 我就是申请一个面上项目而已,这评审意见是按照杰青的条件评的吧? +6 gouxfjh 2026-08-28 11/550 2026-08-30 07:57 by gouxfjh
[基金申请] 国自然面上复盘~欢迎讨论 (金币+15) +15 晴天加油 2026-08-26 16/800 2026-08-29 18:28 by symmetry
[基金申请] 基金系统什么内容也没有 30+4 winsaint 2026-08-27 9/450 2026-08-28 11:06 by maolC
[基金申请] 看板上这么多中的,有点像50人群里49个人都是骗子的那种感觉…… +5 a089 2026-08-26 6/300 2026-08-27 14:05 by jonewore
[基金申请] 怎么看青基中了没有啊 +5 叶九微 2026-08-26 5/250 2026-08-27 10:35 by l_zh2008
[基金申请] 为什么 国际(地区)合作与交流项目 没有放榜? 10+3 majunge000 2026-08-26 11/550 2026-08-27 08:42 by 北京莱茵编辑
[基金申请] 出来了 +9 trojank 2026-08-26 9/450 2026-08-26 14:25 by 宝贝虫子
[基金申请] 系统进不去 +4 yanglien 2026-08-26 5/250 2026-08-26 11:10 by wenfengw83
[基金申请] 国合现在查不到了吗? +10 chengyan1220 2026-08-24 20/1000 2026-08-26 08:57 by peasantsprig
[基金申请] 牛来!米来!面来! +8 beefly 2026-08-26 8/400 2026-08-26 08:37 by xuzhipiao
[基金申请] 某些机构,以效率低为荣,以效率低作为存在感 +9 yuleib84 2026-08-25 10/500 2026-08-25 17:14 by alexon
[基金申请] 没有任何消息-是不是就凉了 +9 图啦图啦 2026-08-24 10/500 2026-08-25 11:59 by 南海小哥
信息提示
请填处理意见