【答案】应助回帖

hold住

21楼2012-05-31 12:10:08

emma立夏

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21楼: Originally posted by zc10052157 at 2012-05-31 12:10:08
还有你转化完的菌有没有全部涂到平板上？

有的，就是吸取900ul上清弃掉。然后就涂板100ul了~

22楼2012-05-31 16:40:36

芒果布丁

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【答案】应助回帖

你试试目的片段7微升和载体1微升吧，16°C过夜就好了，不用放4°C过夜的。。。。

喵星人~

23楼2012-06-01 11:04:21

chenyhok1987

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16楼: Originally posted by emma立夏 at 2012-05-31 10:58:43

十分感谢你的意见提供~！...

那你还没有连接上就换个大彻底，把感受态也换了，双酶切质粒相对切长的保证酶切效果一定要好，然后目的基因的双酶切效果等，然后就是在按照我说的比例问题做个极端比例，然后用大连宝生物的SolutionI,也就是DNA Ligation Kit,编号是D6020S，这个连接酶效果很好的，不长就不要再慢慢找原因了，还是彻底从头做吧，分析出来原因的时间很长的，只要长出来就有希望啊，呵呵，我曾经从17个克隆中才找出一个啊，虽然处理DNA没有处理好，但是还是长出来了啊~~~祝你好运~~~~

平生多磨砺，男儿自横行！

24楼2012-06-05 18:58:08

chenyhok1987

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【答案】应助回帖

11楼的SolutionI你可以试试啊，就是我说的Kit的，编号是D6020S

平生多磨砺，男儿自横行！

25楼2012-06-05 19:00:34

冰风颤木

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4楼: Originally posted by countingcrow at 2012-05-29 06:33:32
有几个问题：
1. 载体上ECOR I 和 Sal I 位点距离会不会太近？一般来说两个克隆位点如果相距太近，会影响酶切效率，导致只有一个位点切开。
2. 载体酶切时条件掌握得好不好，酶切时间会不会太短？如果酶切条件不 ...

你说的我也有同感 ECOR I 和 Sal I 位点很近比如pET32a（+）吧导致二者切不开电泳一片模糊

船到桥头自然直

26楼2013-06-29 11:09:07