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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 如何提高连接效率呢？
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zc10052157

新虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

还有   你转化完的菌有没有全部涂到平板上？
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hold住
21楼2012-05-31 12:10:08
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emma立夏

铁虫 (初入文坛)
引用回帖:
21楼: Originally posted by zc10052157 at 2012-05-31 12:10:08
还有   你转化完的菌有没有全部涂到平板上？

有的，就是吸取900ul上清弃掉。然后就涂板100ul了~
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22楼2012-05-31 16:40:36
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芒果布丁

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

你试试目的片段7微升和载体1微升吧，16°C过夜就好了，不用放4°C过夜的。。。。
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喵星人~
23楼2012-06-01 11:04:21
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chenyhok1987

银虫 (正式写手)
引用回帖:
16楼: Originally posted by emma立夏 at 2012-05-31 10:58:43
十分感谢你的意见提供~！...

那你还没有连接上就换个大彻底，把感受态也换了，双酶切质粒相对切长的保证酶切效果一定要好，然后目的基因的双酶切效果等，然后就是在按照我说的比例问题做个极端比例，然后用大连宝生物的SolutionI,也就是DNA Ligation Kit,编号是D6020S，这个连接酶效果很好的，不长就不要再慢慢找原因了，还是彻底从头做吧，分析出来原因的时间很长的，只要长出来就有希望啊，呵呵，我曾经从17个克隆中才找出一个啊，虽然处理DNA没有处理好，但是还是长出来了啊~~~祝你好运~~~~
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平生多磨砺，男儿自横行！
24楼2012-06-05 18:58:08
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chenyhok1987

银虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

11楼的SolutionI你可以试试啊，就是我说的Kit的，编号是D6020S
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平生多磨砺，男儿自横行！
25楼2012-06-05 19:00:34
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冰风颤木

金虫 (正式写手)
引用回帖:
4楼: Originally posted by countingcrow at 2012-05-29 06:33:32
有几个问题：
1.  载体上ECOR I 和 Sal I 位点距离会不会太近？一般来说两个克隆位点如果相距太近，会影响酶切效率，导致只有一个位点切开。
2. 载体酶切时条件掌握得好不好，酶切时间会不会太短？如果酶切条件不 ...

你说的 我也有同感  ECOR I 和 Sal I 位点很近 比如pET32a（+）吧 导致二者切不开 电泳一片模糊
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船到桥头自然直
26楼2013-06-29 11:09:07
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冰风颤木

金虫 (正式写手)
引用回帖:
23楼: Originally posted by 芒果布丁 at 2012-06-01 11:04:21
你试试目的片段7微升和载体1微升吧，16°C过夜就好了，不用放4°C过夜的。。。。

你是有机合成的 对分子生物学也很了解啊？高手啊
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船到桥头自然直
27楼2013-06-29 11:11:25
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