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zc10052157

新虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

还有   你转化完的菌有没有全部涂到平板上?
hold住
21楼2012-05-31 12:10:08
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emma立夏

铁虫 (初入文坛)

引用回帖:
21楼: Originally posted by zc10052157 at 2012-05-31 12:10:08
还有   你转化完的菌有没有全部涂到平板上?

有的,就是吸取900ul上清弃掉。然后就涂板100ul了~
22楼2012-05-31 16:40:36
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芒果布丁

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

你试试目的片段7微升和载体1微升吧,16°C过夜就好了,不用放4°C过夜的。。。。
喵星人~
23楼2012-06-01 11:04:21
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chenyhok1987

银虫 (正式写手)

引用回帖:
16楼: Originally posted by emma立夏 at 2012-05-31 10:58:43
十分感谢你的意见提供~!...

那你还没有连接上就换个大彻底,把感受态也换了,双酶切质粒相对切长的保证酶切效果一定要好,然后目的基因的双酶切效果等,然后就是在按照我说的比例问题做个极端比例,然后用大连宝生物的SolutionI,也就是DNA Ligation Kit,编号是D6020S,这个连接酶效果很好的,不长就不要再慢慢找原因了,还是彻底从头做吧,分析出来原因的时间很长的,只要长出来就有希望啊,呵呵,我曾经从17个克隆中才找出一个啊,虽然处理DNA没有处理好,但是还是长出来了啊~~~祝你好运~~~~
平生多磨砺,男儿自横行!
24楼2012-06-05 18:58:08
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chenyhok1987

银虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

11楼的SolutionI你可以试试啊,就是我说的Kit的,编号是D6020S
平生多磨砺,男儿自横行!
25楼2012-06-05 19:00:34
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冰风颤木

金虫 (正式写手)

引用回帖:
4楼: Originally posted by countingcrow at 2012-05-29 06:33:32
有几个问题:
1.  载体上ECOR I 和 Sal I 位点距离会不会太近?一般来说两个克隆位点如果相距太近,会影响酶切效率,导致只有一个位点切开。
2. 载体酶切时条件掌握得好不好,酶切时间会不会太短?如果酶切条件不 ...

你说的 我也有同感  ECOR I 和 Sal I 位点很近 比如pET32a(+)吧 导致二者切不开 电泳一片模糊
船到桥头自然直
26楼2013-06-29 11:09:07
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冰风颤木

金虫 (正式写手)

引用回帖:
23楼: Originally posted by 芒果布丁 at 2012-06-01 11:04:21
你试试目的片段7微升和载体1微升吧,16°C过夜就好了,不用放4°C过夜的。。。。

你是有机合成的 对分子生物学也很了解啊?高手啊
船到桥头自然直
27楼2013-06-29 11:11:25
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