| 查看: 3520 | 回复: 26 | ||
| 当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖 | ||
[求助]
如何提高连接效率呢？
|
||
|
各位科研上的战友，大家帮我看看分析一下实验失败的原因。 我是从T载体上双酶切（酶为EcoR I和Sal I）下了我的目的片段，然后载体也已经用相同的酶的线性化，做到连接转化这一步老是不成功，很困惑。 连接体系是： 片段 6ul 线性化载体 2ul T4ligase 1ul buffer 1ul total 10ul 16℃反应4h，4℃过夜，之后加100ul感受态。转化 在转化和感受态都是没问题的，因为做了对照试验。 我的浓度比基本都是看条带marker亮度估算的，没用相关仪器来检测准确浓度。 很多战友都说要不断摸索片段和载体的浓度比【这步是否需要呢？】。那这样是否需要很多次的连接转化呢？ |
回复此楼» 猜你喜欢
为什么蛋白质氨基酸测定大家都测17种?
已经有5人回复
-
《灰分记：我与坩埚的“灰烬”之恋》
已经有3人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有218人回复
-
求助 食品检验工（基础知识），中国劳动社会出版社 电子版
已经有5人回复
-
胶体几丁质的结晶度？
已经有0人回复
-
诚挚招收全日制博士！！！中国农业科学院麻类研究所谭志坚研究员课题组招收博士
已经有2人回复
-
三甲基羟乙基丙二胺的合成路线
已经有5人回复
chenyhok1987
银虫 (正式写手)
- 应助: 11 (小学生)
- 金币: 3164.8
- 散金: 800
- 红花: 6
- 帖子: 632
- 在线: 569.1小时
- 虫号: 1418854
- 注册: 2011-09-27
- 性别: GG
- 专业: 污染控制化学
25楼2012-06-05 19:00:34
yunocn
金虫 (小有名气)
- 应助: 8 (幼儿园)
- 金币: 1005.4
- 散金: 26
- 帖子: 165
- 在线: 122.5小时
- 虫号: 1175684
- 注册: 2010-12-23
- 专业: 生物大分子结构与功能
2楼2012-05-28 17:17:27
caohaojie316
铜虫 (正式写手)
- 应助: 27 (小学生)
- 金币: 174
- 散金: 619
- 红花: 5
- 帖子: 337
- 在线: 62.1小时
- 虫号: 1830322
- 注册: 2012-05-22
- 性别: GG
- 专业: 生物大分子结构与功能
3楼2012-05-28 21:47:49
countingcrow
铁杆木虫 (小有名气)
- 应助: 9 (幼儿园)
- 金币: 7322.6
- 散金: 140
- 红花: 3
- 帖子: 271
- 在线: 520.2小时
- 虫号: 1807081
- 注册: 2012-05-09
- 性别: GG
- 专业: 自身免疫性疾病
4楼2012-05-29 06:33:32