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zhsDONG

银虫 (小有名气)

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专业: 环境微生物学

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
小丹木木: 金币+1, 鼓励交流 2012-05-30 13:41:56

比例只要不是偏差太大一般问题就不大。氯化钙法制备的感受态效率较低，要加大感受态量。还有T4连接酶连接效率不如solutionI。

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11楼2012-05-30 09:26:59

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蛋白之家

新虫 (小有名气)

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专业: 病原细菌与放线菌生物学

我测了浓度又试了 3:1的长了两个昨天又试做了3:1 2:1 9:1 不过还没有转化呢明天就出结果到时候可以分享一下哪个比例好些

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» 本帖已获得的红花（最新10朵）

emma立夏

12楼2012-05-30 09:41:20

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chenyhok1987

银虫 (正式写手)

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专业: 污染控制化学

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
小丹木木: 金币+3, 鼓励应助 2012-05-30 13:42:10

载体与目的基因摩尔比是1：3到1：10之间，你每次根绝Marker估计一下DNA的质量，然后计算一下DNA的分子量，这么一比就是摩尔数的，这个比例在重组连接中是很关键的，我做的是一端平端一段粘端都是这样连接起来的，我一般采用大致1：10的比例。

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平生多磨砺，男儿自横行！

13楼2012-05-30 10:24:46

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早冰124

新虫 (初入文坛)

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【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
小丹木木: 金币+1, 鼓励交流 2012-05-30 13:42:24

连接时插入片段和载体的摩尔比很重要，一半至少4：1以上，同时连接反应时间最好延长，能16度连接12小时再4度保存几个小时比较好

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14楼2012-05-30 10:56:11

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emma立夏

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送鲜花一朵

引用回帖:

12楼: Originally posted by 蛋白之家 at 2012-05-30 09:41:20
我测了浓度又试了 3:1的长了两个昨天又试做了3:1 2:1 9:1 不过还没有转化呢明天就出结果到时候可以分享一下哪个比例好些

好的，期待你的结果报告~！！

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15楼2012-05-31 10:58:11

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emma立夏

铁虫 (初入文坛)

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专业: 生物大分子结构与功能

引用回帖:

13楼: Originally posted by chenyhok1987 at 2012-05-30 10:24:46
载体与目的基因摩尔比是1：3到1：10之间，你每次根绝Marker估计一下DNA的质量，然后计算一下DNA的分子量，这么一比就是摩尔数的，这个比例在重组连接中是很关键的，我做的是一端平端一段粘端都是这样连接起来的，我 ...