应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 如何提高连接效率呢？
272/3返回列表上一页123下一页
查看: 4277  |  回复: 26
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

zhsDONG

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
小丹木木: 金币+1, 鼓励交流 2012-05-30 13:41:56
比例只要不是偏差太大一般问题就不大。氯化钙法制备的感受态效率较低，要加大感受态量。还有T4连接酶连接效率不如solutionI。
赞一下 回复此楼
11楼2012-05-30 09:26:59
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

蛋白之家

新虫 (小有名气)
我测了浓度  又试了   3:1的长了两个   昨天又试做了3:1 2:1  9:1 不过还没有转化呢   明天就出结果   到时候可以分享一下哪个比例好些
赞一下 回复此楼

» 本帖已获得的红花（最新10朵）

emma立夏
12楼2012-05-30 09:41:20
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

chenyhok1987

银虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
小丹木木: 金币+3, 鼓励应助 2012-05-30 13:42:10
载体与目的基因摩尔比是1：3到1：10之间，你每次根绝Marker估计一下DNA的质量，然后计算一下DNA的分子量，这么一比就是摩尔数的，这个比例在重组连接中是很关键的，我做的是一端平端一段粘端都是这样连接起来的，我一般采用大致1：10的比例。
赞一下(1人) 回复此楼
平生多磨砺，男儿自横行！
13楼2012-05-30 10:24:46
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

早冰124

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
小丹木木: 金币+1, 鼓励交流 2012-05-30 13:42:24
连接时插入片段和载体的摩尔比很重要，一半至少4：1以上，同时连接反应时间最好延长，能16度连接12小时再4度保存几个小时比较好
赞一下 回复此楼
14楼2012-05-30 10:56:11
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

emma立夏

铁虫 (初入文坛)
送鲜花一朵
引用回帖:
12楼: Originally posted by 蛋白之家 at 2012-05-30 09:41:20
我测了浓度  又试了   3:1的长了两个   昨天又试做了3:1 2:1  9:1 不过还没有转化呢   明天就出结果   到时候可以分享一下哪个比例好些

好的，期待你的结果报告~！！
赞一下 回复此楼
15楼2012-05-31 10:58:11
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

emma立夏

铁虫 (初入文坛)
引用回帖:
13楼: Originally posted by chenyhok1987 at 2012-05-30 10:24:46
载体与目的基因摩尔比是1：3到1：10之间，你每次根绝Marker估计一下DNA的质量，然后计算一下DNA的分子量，这么一比就是摩尔数的，这个比例在重组连接中是很关键的，我做的是一端平端一段粘端都是这样连接起来的，我 ...

十分感谢你的意见提供~！
赞一下 回复此楼
16楼2012-05-31 10:58:43
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

emma立夏

铁虫 (初入文坛)
引用回帖:
14楼: Originally posted by 早冰124 at 2012-05-30 10:56:11
连接时插入片段和载体的摩尔比很重要，一半至少4：1以上，同时连接反应时间最好延长，能16度连接12小时再4度保存几个小时比较好

谢谢你的提醒，我会试着看看延长连接时间，但是大家有没有过遇到过连接不上的呢？，我昨天又试了一次是1：5的，还是没有长斑~~~每次看到空空的板，内心真是好纠结~！
赞一下 回复此楼
17楼2012-05-31 11:01:13
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

caoluoyuan

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
连接酶换支新的试试，不然这很容易连上，转化也是高效的
赞一下 回复此楼
18楼2012-05-31 11:34:52
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

emma立夏

铁虫 (初入文坛)
引用回帖:
18楼: Originally posted by caoluoyuan at 2012-05-31 11:34:52
连接酶换支新的试试，不然这很容易连上，转化也是高效的

我就是新买的酶哦~
赞一下 回复此楼
19楼2012-05-31 12:03:05
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zc10052157

新虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
我一般连接20微升   不加水  水的部分都用的基因片段  相应的质粒也多加点    转DH5α都没有出过问题
赞一下 回复此楼
hold住
20楼2012-05-31 12:05:18
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 emma立夏 的主题更新
272/3返回列表上一页123下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 售SCI一区文章，我:8.O.551.O.5.4,科目全,可伽急 +3 ZYXdhzDAy9ZX 2026-09-28 3/150 2026-09-29 06:42 by ZvyPK8n6Nfki
[找工作] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +3 ZYXdhzDAy9ZX 2026-09-28 3/150 2026-09-29 06:34 by ZvyPK8n6Nfki
[找工作] 售SCI一区文章，我:8.O.551.O.5.4,科目全,可伽急 +3 ZYXdhzDAy9ZX 2026-09-28 3/150 2026-09-29 06:28 by ZvyPK8n6Nfki
[考博] 售SCI一区文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +3 ZYXdhzDAy9ZX 2026-09-28 3/150 2026-09-29 06:18 by ZvyPK8n6Nfki
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 tqUTOxClQUMF 2026-09-28 3/150 2026-09-28 23:46 by b8fCuTHqckEt
[考博] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可+急 +4 GDBe8tDZqE8z 2026-09-28 4/200 2026-09-28 23:19 by b8fCuTHqckEt
[考研] 售SCI一区文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +3 GDBe8tDZqE8z 2026-09-28 3/150 2026-09-28 23:12 by b8fCuTHqckEt
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 CfXuS1rDhLYN 2026-09-28 4/200 2026-09-28 22:55 by ez6fGg9abYaj
[公派出国] 售SCI一区文章，我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +4 IDs3scOF0tjC 2026-09-28 4/200 2026-09-28 22:55 by ez6fGg9abYaj
[博后之家] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +4 IDs3scOF0tjC 2026-09-28 5/250 2026-09-28 22:45 by ez6fGg9abYaj
[有机交流] 同一个分子，一条来自文献，一条来自AI——不告诉你答案，你会选哪条？ +3 tianxiaoxian 2026-09-28 6/300 2026-09-28 22:44 by tianxiaoxian
[找工作] 售SCI文章，我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +3 IDs3scOF0tjC 2026-09-28 5/250 2026-09-28 22:32 by ez6fGg9abYaj
[公派出国] 售一区SCI文章T0P，我:8O.551.O54,科目全,可十急 +3 IDs3scOF0tjC 2026-09-28 4/200 2026-09-28 22:28 by ez6fGg9abYaj
[博后之家] 售SCI文章，我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +3 IDs3scOF0tjC 2026-09-28 3/150 2026-09-28 22:21 by ez6fGg9abYaj
[考博] 售SCI文章，我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +3 IDs3scOF0tjC 2026-09-28 6/300 2026-09-28 22:15 by ez6fGg9abYaj
[论文投稿] 售SCI文章，我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 CfXuS1rDhLYN 2026-09-28 3/150 2026-09-28 19:08 by 9lS3ad5oOymn
[考研] 售一区SCI文章T0P，我:8O.551.O54,科目全,可十急 +3 IDs3scOF0tjC 2026-09-28 4/200 2026-09-28 18:51 by 9lS3ad5oOymn
[找工作] 售SCI一区文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +4 IDs3scOF0tjC 2026-09-28 4/200 2026-09-28 17:30 by ZYXdhzDAy9ZX
[教师之家] 某top大学教授说“能够在市场中兑现的能力才是真能力”无比同意！ +7 zju2000 2026-09-26 8/400 2026-09-28 16:42 by beefly
[教师之家] 售一区SCI文章T0P，我:8O.551.O54,科目全,可十急 +3 GDBe8tDZqE8z 2026-09-28 3/150 2026-09-28 15:32 by ZYXdhzDAy9ZX
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭