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zhsDONG

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
小丹木木: 金币+1, 鼓励交流 2012-05-30 13:41:56
比例只要不是偏差太大一般问题就不大。氯化钙法制备的感受态效率较低，要加大感受态量。还有T4连接酶连接效率不如solutionI。
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11楼2012-05-30 09:26:59
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蛋白之家

新虫 (小有名气)
我测了浓度  又试了   3:1的长了两个   昨天又试做了3:1 2:1  9:1 不过还没有转化呢   明天就出结果   到时候可以分享一下哪个比例好些
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» 本帖已获得的红花（最新10朵）

emma立夏
12楼2012-05-30 09:41:20
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chenyhok1987

银虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
小丹木木: 金币+3, 鼓励应助 2012-05-30 13:42:10
载体与目的基因摩尔比是1：3到1：10之间，你每次根绝Marker估计一下DNA的质量，然后计算一下DNA的分子量，这么一比就是摩尔数的，这个比例在重组连接中是很关键的，我做的是一端平端一段粘端都是这样连接起来的，我一般采用大致1：10的比例。
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平生多磨砺，男儿自横行！
13楼2012-05-30 10:24:46
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早冰124

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
小丹木木: 金币+1, 鼓励交流 2012-05-30 13:42:24
连接时插入片段和载体的摩尔比很重要，一半至少4：1以上，同时连接反应时间最好延长，能16度连接12小时再4度保存几个小时比较好
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14楼2012-05-30 10:56:11
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emma立夏

铁虫 (初入文坛)
送鲜花一朵
引用回帖:
12楼: Originally posted by 蛋白之家 at 2012-05-30 09:41:20
我测了浓度  又试了   3:1的长了两个   昨天又试做了3:1 2:1  9:1 不过还没有转化呢   明天就出结果   到时候可以分享一下哪个比例好些

好的，期待你的结果报告~！！
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15楼2012-05-31 10:58:11
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emma立夏

铁虫 (初入文坛)
引用回帖:
13楼: Originally posted by chenyhok1987 at 2012-05-30 10:24:46
载体与目的基因摩尔比是1：3到1：10之间，你每次根绝Marker估计一下DNA的质量，然后计算一下DNA的分子量，这么一比就是摩尔数的，这个比例在重组连接中是很关键的，我做的是一端平端一段粘端都是这样连接起来的，我 ...

十分感谢你的意见提供~！
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16楼2012-05-31 10:58:43
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emma立夏

铁虫 (初入文坛)
引用回帖:
14楼: Originally posted by 早冰124 at 2012-05-30 10:56:11
连接时插入片段和载体的摩尔比很重要，一半至少4：1以上，同时连接反应时间最好延长，能16度连接12小时再4度保存几个小时比较好

谢谢你的提醒，我会试着看看延长连接时间，但是大家有没有过遇到过连接不上的呢？，我昨天又试了一次是1：5的，还是没有长斑~~~每次看到空空的板，内心真是好纠结~！
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17楼2012-05-31 11:01:13
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caoluoyuan

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
连接酶换支新的试试，不然这很容易连上，转化也是高效的
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18楼2012-05-31 11:34:52
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emma立夏

铁虫 (初入文坛)
引用回帖:
18楼: Originally posted by caoluoyuan at 2012-05-31 11:34:52
连接酶换支新的试试，不然这很容易连上，转化也是高效的

我就是新买的酶哦~
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19楼2012-05-31 12:03:05
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zc10052157

新虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
我一般连接20微升   不加水  水的部分都用的基因片段  相应的质粒也多加点    转DH5α都没有出过问题
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hold住
20楼2012-05-31 12:05:18
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