| 查看: 3824 | 回复: 26 | ||
| 当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖 | ||
[求助]
如何提高连接效率呢？
|
||
|
各位科研上的战友，大家帮我看看分析一下实验失败的原因。 我是从T载体上双酶切（酶为EcoR I和Sal I）下了我的目的片段，然后载体也已经用相同的酶的线性化，做到连接转化这一步老是不成功，很困惑。 连接体系是： 片段 6ul 线性化载体 2ul T4ligase 1ul buffer 1ul total 10ul 16℃反应4h，4℃过夜，之后加100ul感受态。转化 在转化和感受态都是没问题的，因为做了对照试验。 我的浓度比基本都是看条带marker亮度估算的，没用相关仪器来检测准确浓度。 很多战友都说要不断摸索片段和载体的浓度比【这步是否需要呢？】。那这样是否需要很多次的连接转化呢？ |
回复此楼» 猜你喜欢
湖北师范大学招调剂啦
已经有9人回复
-
邵阳学院食品与化学工程学院硕士调剂
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有158人回复
-
天津商业大学 生物与医药课题组招生
已经有0人回复
-
生物化工学硕招收调剂
已经有0人回复
-
广东石油化工学院2026年硕士研究生需要多名生物，制药工程，食品专业的调剂生
已经有0人回复
-
化工申博
已经有3人回复
-
申博自荐
已经有3人回复
-
广西民族大学化学化工学院化学工程与技术学硕，材料化工专硕调剂名额充足！
已经有0人回复
chenyhok1987
银虫 (正式写手)
- 应助: 11 (小学生)
- 金币: 3101.2
- 散金: 814
- 红花: 6
- 帖子: 633
- 在线: 569.6小时
- 虫号: 1418854
- 注册: 2011-09-27
- 性别: GG
- 专业: 污染控制化学
13楼2012-05-30 10:24:46
yunocn
金虫 (小有名气)
- 应助: 8 (幼儿园)
- 金币: 1005.4
- 散金: 26
- 帖子: 165
- 在线: 122.5小时
- 虫号: 1175684
- 注册: 2010-12-23
- 专业: 生物大分子结构与功能
2楼2012-05-28 17:17:27
caohaojie316
铜虫 (正式写手)
- 应助: 27 (小学生)
- 金币: 174
- 散金: 619
- 红花: 5
- 帖子: 337
- 在线: 62.1小时
- 虫号: 1830322
- 注册: 2012-05-22
- 性别: GG
- 专业: 生物大分子结构与功能
3楼2012-05-28 21:47:49
countingcrow
铁杆木虫 (小有名气)
- 应助: 9 (幼儿园)
- 金币: 7322.6
- 散金: 140
- 红花: 3
- 帖子: 271
- 在线: 520.2小时
- 虫号: 1807081
- 注册: 2012-05-09
- 性别: GG
- 专业: 自身免疫性疾病
4楼2012-05-29 06:33:32
50