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shengnan1987

铁虫 (初入文坛)

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在线: 14.4小时
虫号: 1118306
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专业: 预防医学其他科学问题

[求助] 带HIS标签的可溶蛋白的纯化问题

我做的是一种蛋白酶的原核表达，c端带一个his标签，大小31kd，等电点10，pet24a可溶表达，但表达量不高，不到50%，用镍柱纯化，Binding: 20 mM sodium phosphate, 20 mM Imidazole,500 mM NaCl, PH 8.0
Elution: 20 mM sodium phosphate, 500 mM Imidazole,
500 mM NaCl, PH8.0
调整咪唑的浓度，要么峰型好，但杂带还是很多；要么没有特异的峰出现。请问各位高手有没有好的纯化方法？非常感谢

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走自己的路

1楼 2012-05-27 13:06:47

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edoz1986

新虫 (小有名气)

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虫号: 986360
注册: 2010-03-31
性别: MM
专业: 生物大分子结构与功能

用20mm imi的上样，最好中间加一个50mm的imi继续洗杂。再一个可能就是你的蛋白降解了，那么带his标签的降解带也会挂柱子，建议用wb检测一下是否降解带。

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20楼2013-05-23 09:35:06

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孙启亮

金虫 (著名写手)

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注册: 2010-10-01
性别: GG
专业: 前寒武纪地质学

西瓜: 金币-40, 2楼赞助楼主散金 2012-05-27 18:43:25
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西瓜: 金币-20, 2楼赞助楼主散金。共100金币。 2012-05-27 18:44:08
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西瓜: 金币+50, 返回之前赞助金币 2012-06-04 14:35:18

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