应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 存档旧帖 » 蛋白表达可不可能存在内含肽剪接
51/1返回列表
查看: 2159  |  回复: 7
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
本帖产生 1 个 MolEPI ，点击这里进行查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

593318518

新虫 (小有名气)

[求助] 蛋白表达可不可能存在内含肽剪接

最近使用大肠杆菌大量表达一种细菌的细胞色素c。但是western验证的时候发现大小错误。同表达的其他细胞色素C都很正常，所以怀疑是不是有可能存在内含肽剪接。或者有其他可能？
回复此楼

» 收录本帖的淘帖专辑推荐

分子生化实验经验积累 【分子生物】EPI帖

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2012-05-25 08:49:21
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

凌波丽

专家顾问 (知名作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
小丹木木: 金币+3, MolEPI+1, 分析的很全面了哈 2012-05-25 13:52:51
蛋白质内含子剪切（protein cleavage）和剪接（protein splicing)都是有可能的，protein cleavage一般是由其他蛋白酶作用产生的，只是切不连接，protein splicing则不需要其他酶或者蛋白质作用，发生protein splicing的多肽自己就可以进行既切掉多肽序列中的一段或几段序列(inteins)又把剩下的序列重新连接在一起，而且重新连接的片段有时还会发生重排，比如伴刀豆蛋白不仅剪切掉中间一段序列，而且其原先的N-末端和C-末端序列，即所谓的exteins，彼此相对位置会发生交换，N-末端成为了成熟蛋白质的C-末端序列，C-末端成为了成熟蛋白质的N-末端序列。这样的protein splicing首先是有蛋白质的本身的一级和空间结构决定的。
阅读框改变，肯定蛋白质的一级结构就完全不同了。
还有是发生了RNA editing，这时可能会有终止密码改变或者中间的编码改变而引起蛋白质序列改变，进而引起蛋白质的空间结构改变。
蛋白质降解也是必须考虑的一个问题，这与表达的工程细胞中的蛋白酶有关，可以考虑使用分泌表达或者共表达。
Translational Hopping，及翻译时发生核糖体跳读，在同一条mRNA中有些密码子不翻译，这样的情比较少见。可能与mRNA形成二级结构或者密码子稀有性相关，如果是大肠杆菌，可能在营养极度缺乏时的应急反应也有关系。
不管什么原因，检测起来不难，首先做个表达的蛋白质的N-末端与C--末端，降解和提前终止或者不正常起始翻译一般都可以检测出来，再用同种酶同样条件下切割表达的蛋白质和正常的蛋白质标准品，然后分别走个电泳，可以比较出序列大致差异在何处，即肽谱分析。
赞一下 回复此楼
4楼2012-05-25 11:21:28
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 8 个回答

lxj341401

至尊木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
小丹木木: 金币+2, 辛苦辛苦 2012-05-25 13:52:18
内含肽剪接这种现象是有的，如NEB公司的IMPACT System，利用的就是内含肽切除标签。
Chong S, Mersha FB, Comb DG,et al.Single-column purification of free recombinant proteins using a self-cleavable affinity tag derived from a protein splicing element [J]. Gene. 1997 192(2):271-81.
赞一下 回复此楼
2楼2012-05-25 10:44:27
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lxj341401

至尊木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★
西瓜: 金币+1, 专家考核, 专家辛苦！ 2012-05-26 10:56:40
其他可能是读码框不对，或有突变，导致提前终止。
赞一下 回复此楼
3楼2012-05-25 10:45:58
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

mlanqiang

木虫之王 (文学泰斗)

蓝博士

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
西瓜: 金币+1, 鼓励应助 2012-05-26 10:56:50
发生了RNA editing，这时可能会有终止密码改变。
赞一下 回复此楼
蓝精灵
5楼2012-05-25 12:21:16
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 8 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 欢迎发来filecode的Mz6后的代码验证其规律 +32 医学老男孩 2026-08-13 72/3600 2026-08-16 13:15 by 医学老男孩
[基金申请] 咱们一起用铁证分析2026国家社科基金中标与否 +7 启萌科技 2026-08-12 26/1300 2026-08-16 12:35 by 启萌科技
[精细化工] 招聘 金属平磨液，抛光液研发工程师 +3 小天0311 2026-08-14 3/150 2026-08-16 07:31 by H9PLUS
[基金申请] 时间戳又变了8-15 +12 archvillain 2026-08-15 23/1150 2026-08-15 20:47 by foyo404
[基金申请] filecode=后面第一个是大写字母 +6 wangze12014 2026-08-14 7/350 2026-08-15 20:12 by gltch
[基金申请] 关于Filecode分析方法 +10 majunge000 2026-08-10 13/650 2026-08-15 12:26 by hanpeng972
[基金申请] 各位道友，我要去昆明玩几天，回来见。 +7 Tide man 2026-08-14 8/400 2026-08-15 01:11 by arzu_hma
[基金申请] 是这周出结果还是下周出结果？ +4 yuleib84 2026-08-11 4/200 2026-08-14 23:05 by lfy8008
[基金申请] 奇怪，两个人的filecode固定段从头到尾一模一样 +8 布布和一二 2026-08-10 11/550 2026-08-14 14:58 by Equinoxhua
[硕博家园] 读博的好处 +4 lnee 2026-08-11 4/200 2026-08-14 10:20 by ahsoarli
[基金申请] FileCode能看出啥？ +10 要乐观耀哥 2026-08-10 32/1600 2026-08-14 09:37 by 要乐观耀哥
[基金申请] 静等基金结果 +8 gjjjzhong 2026-08-10 21/1050 2026-08-13 17:56 by 且听虎啸
[基金申请] 分享一下我之前已中青C的计划书的filecode +4 布布和一二 2026-08-11 5/250 2026-08-13 12:56 by cratir
[基金申请] 结合人工智能，周易传统文化，filecode打分制来了，3分以上希望很大。 +3 Tide man 2026-08-12 4/200 2026-08-13 08:35 by ZJTJZ
[基金申请] 综述论文作为代表作会不会影响评审专家的印象分？ +11 yufeiwaner 2026-08-09 13/650 2026-08-12 08:17 by yufeiwaner
[基金申请] 什么时候出结果，有咨询渠道？？？ +3 Tide man 2026-08-11 3/150 2026-08-11 17:54 by kudofaye
[基金申请] 确定了，国自然21号放榜 +6 布布和一二 2026-08-10 7/350 2026-08-10 19:15 by 2000zf36392
[基金申请] 国自然结果 +4 Vierhys 2026-08-10 8/400 2026-08-10 15:06 by Vierhys
[基金申请] 据悉今年马上要出结果了 +7 瞬息宇宙 2026-08-10 8/400 2026-08-10 12:42 by Vivilian
[基金申请] 面上项目filecode邪修 +5 西山十月 2026-08-09 7/350 2026-08-10 07:32 by 仁砚薪传
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭