| 查看: 1973 | 回复: 6 | ||
| 当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖 | ||
yuehuashou新虫 (初入文坛)
|
[求助]
洗脱不下来，怎么办？
|
|
|
前天做免疫亲和层析，填料是CNBr activated sepharose 4B，用抗体交联，样品溶解于PBS，洗脱液是pH2.5 0.1M Gly-Hcl，过柱后用pH 8.4 1M Tris-Hcl中和，然后用ELISA检，洗脱液没有阳性反应，我用PBS溶解标样，浓度是样品的1000倍左右，同样的操作，ELISA检有阳性反应，样品中目的蛋白的浓度很低，不过标样能洗脱下来，那么样品也能够洗脱下来才对，更奇怪的是ELISA结果显示标样过柱后的浓度比没过柱的大（两次用的同一柱）。实验时我发现洗脱下来液体很浑浊，中和后便澄清，怀疑可能是目的蛋白发生了酸解，于是直接用洗脱液稀释样品，然后以10s为间隔中和，用ELISA检，发现一分钟内对目的蛋白没影响。请教大家我的实验到底是什么地方出了问题，是不是没有洗脱下来，应该怎样改进，我打算换洗脱条件，用中性pH高盐的洗脱液洗，不知道是不是洗脱液的问题...... 补充一下，要纯化的目的蛋白来自棉花，标样得自细菌。刚接触免疫亲和层析，希望得到大家的帮助，非常感谢！ |
回复此楼» 猜你喜欢
332求调剂
已经有5人回复
-
085701求调剂初试286分
已经有3人回复
-
材料工程294求调剂
已经有4人回复
-
本科新能源科学与工程，一志愿华理能动285求调剂
已经有10人回复
-
070305高分子化学与物理 304分求调剂
已经有5人回复
-
083000学硕274求调剂
已经有8人回复
-
一志愿北京化工大学材料与化工（085600）296求调剂
已经有10人回复
-
求调剂一志愿海大，0703化学学硕304分，有大创项目，四级已过
已经有11人回复
-
071000生物学求调剂，初试成绩343
已经有7人回复
-
0703化学调剂，求导师收
已经有8人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 过柱子极性太大用甲醇都淋不下来怎么办？？？
已经有17人回复
- 疏水层析蛋白洗不下来怎么办
已经有10人回复
- 阴离子交换树脂上阴离子（十二烷基苯磺酸钠）不能洗脱下来
已经有15人回复
- 加氢催化剂的活性组分能洗脱下来么？
已经有14人回复
- 【求助】急求！极性大孔上样丙酮洗脱不下来怎么办啊？
已经有5人回复
- 【求助】怎么将硅胶柱吸附的样品洗脱下来？
已经有8人回复
- 【求助】固相萃取，吸附的物质就是洗脱不下来，怎么办
已经有4人回复
- 【求助/交流】SP柱子纯化蛋白，蛋白结合后，用2M NacL都没有洗脱下来，该怎么办？
已经有5人回复
llyman
银虫 (小有名气)
- 应助: 2 (幼儿园)
- 金币: 1305.7
- 散金: 50
- 帖子: 235
- 在线: 50.2小时
- 虫号: 1520803
- 注册: 2011-12-02
- 专业: 植物生殖生物学
7楼2013-03-21 09:43:40
wolfman840
木虫 (正式写手)
- BioEPI: 2
- 应助: 225 (大学生)
- 金币: 3524.8
- 散金: 20
- 红花: 12
- 帖子: 702
- 在线: 63.2小时
- 虫号: 902627
- 注册: 2009-11-14
- 性别: GG
- 专业: 生物技术药物
2楼2012-05-24 14:54:17
yuehuashou
新虫 (初入文坛)
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 35.8
- 散金: 3
- 帖子: 21
- 在线: 2.2小时
- 虫号: 858183
- 注册: 2009-09-27
- 性别: GG
- 专业: 植物生理与生化
3楼2012-05-24 23:18:53
hinge1001
银虫 (小有名气)
- 应助: 17 (小学生)
- 金币: 331.5
- 散金: 10
- 帖子: 253
- 在线: 183.1小时
- 虫号: 1823881
- 注册: 2012-05-18
- 性别: GG
- 专业: 色谱分析
4楼2012-05-29 08:58:44
