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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 请问western用的二抗放时间长了或者反复“冻融”的话会有什么后果
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silentstorm

铁虫 (初入文坛)

[求助] 请问western用的二抗放时间长了或者反复“冻融”的话会有什么后果

我最近在做ip跑western，最后膜用考马斯亮蓝染能染出蛋白，但wb暴不出来，甚至连内参都没有。一抗是公用的，所以怀疑是二抗的问题，请问二抗出问题的几率大吗？
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1楼 2012-05-23 00:08:47
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atlanticwi

金虫 (正式写手)

琴美喜欢发呆 不喜欢发脾气

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
小丹木木: 金币+1, 鼓励交流 2012-05-23 14:01:54
嗯..................
       二抗应该不会出现冻融吧 不是加有足够的甘油？还是楼主和偶们用的产品不一样............
       提供一个简单的识别方法 请参照偶回答过的帖子
       http://muchong.com/bbs/viewthread.php?tid=4293764&authorid=1099992
       希望有所帮助
赞一下 回复此楼
Let God do with it as He wills
2楼2012-05-23 00:27:05
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jasonwyb123

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
小丹木木: 金币+1, 鼓励交流 2012-05-23 14:02:05
“最后膜用考马斯亮蓝染能染出蛋白”

这句话是啥意思啊？我咋没看明白呢，你是说转膜之后用考马斯去染吗？我们只有在染胶的时候才会用考马斯亮蓝的，染膜是用丽春红吧，以前做过的，现在转行，不是很记得了。
我建议是考虑一下是否转膜成功，或者转膜时损失太大了，另外你应该把抗体提前分装成小管，用完就不要在用了
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3楼2012-05-23 09:18:12
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silentstorm

铁虫 (初入文坛)
二抗是放四度，我的意思是经常四度——室温，所以冻融加了引号
我们实验室膜跟胶都是用考马斯亮蓝染得，能染出来。
之前分了一小管二抗出来，可能时间有点久了，所以担心是不是二抗的原因。回头我换个二抗再试下吧~
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4楼2012-05-23 18:33:47
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