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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 实验/技术 » 邻苯二酚1,2，邻苯二酚2,3双加氧酶基因扩增遇到大问题·········
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shipolande

新虫 (初入文坛)

[求助] 邻苯二酚1,2，邻苯二酚2,3双加氧酶基因扩增遇到大问题·········

本人最近做土壤中细菌邻苯二酚1,2，邻苯二酚2,3双加氧酶基因扩增，想PCR找出目的条带，可是做了好久了一直没有出现目的条带，心情十分郁闷，一直P不出来，模板是土壤总DNA，引物是文献上找的，条件也是参照文献的，就是抑制P不出条带，有哪位大侠做过的，给小弟一点点指点，本人就像做出点东西啊，可是自己知识面有限，经验又少，望大虾们给小弟点提示，在这感激不尽了啊······亲
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shipolande
1楼 2012-05-21 20:18:01
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l68266152

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

引用回帖:
3楼: Originally posted by shipolande at 2012-05-23 10:49:55:
可是以后做的实验也不是污染土壤，而是种植作物连作土······

用高保守序列设计兼并引物，买用于扩增痕迹量模板的酶，多看看文献，我不认为能从无特异富集的土壤中扩增出这种酶。。。。
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相信自己
4楼2012-05-23 18:40:46
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l68266152

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
先要用相应的底物富集下微生物吧？
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相信自己
2楼2012-05-22 08:37:12
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shipolande

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by l68266152 at 2012-05-22 08:37:12:
先要用相应的底物富集下微生物吧？

可是以后做的实验也不是污染土壤，而是种植作物连作土······
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shipolande
3楼2012-05-23 10:49:55
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天鸟

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
对于功能基因从环境中扩增确实很多时候是扩增不出来的
这和你环境中的该基因的丰度有关，有些基因功能基因很好扩增，而且多样性也不错，如果你环境中该类基因很少的话，它的多样性也可能就是一两个OTU的，你如果你一定要做的话，一个是你可以重复扩增几次，一次不行，可以两次，三次。他们说的富集的方法确实可行的，但可能不是你当初设计试验的初衷。祝好
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快乐生活，我快乐
5楼2012-05-24 08:56:32
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