24小时热门版块排行榜

返回列表

当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

rkr0427

铜虫 (初入文坛)

应助: 0 (幼儿园)
金币: 153.5
帖子: 2
在线: 12分钟
虫号: 1596724
注册: 2012-02-02

[求助] 如何摸索液相色谱条件

如何摸索液相色谱条件，需经过哪些程序或者步骤

回复此楼

» 收录本帖的淘帖专辑推荐

新药研发

液相相关

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:

1楼 2012-05-20 22:35:18

已阅回复此楼关注TA 给TA发消息送TA红花 TA的回帖

痴夷子皮

版主 (文坛精英)

老痞

DRDEPI: 8
应助: 2016 (讲师)
贵宾: 5.368
金币: 54487.3
散金: 41688
红花: 303
沙发: 1206
帖子: 32611
在线: 4303.7小时
虫号: 674536
注册: 2008-12-14
性别: GG
专业: 无神论
管辖: 人文社科

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
mouse103: 金币+5, 谢谢分享 2012-05-21 15:03:46
rkr0427: 金币+10, ★★★很有帮助 2012-05-21 19:29:28

1、如果能有相关的文献或资料参考，估计会相对比较简单。
2、条件摸索
a、样品性质
主要了解化合物的结构、分子量、pKa、UV、样品浓度范围、溶解度等。
b、色谱柱选择
样品能溶于水-有机混合液的大多数样品（特别是中性或非离子化合物），可以选择反相HPLC，流动相选择水-有机溶剂，色谱柱可以选择C18、C8、TMS、苯基、氰基。一般C18用得比较多。
样品为离子或可电离的化合物（特别是碱性或阳离子样品），可以选择离子对HPLC，流动相选择水-有机溶剂，控制pH的缓冲液和离子对试剂，色谱柱可选择C18、C8、氰基。一般C18用得比较多。
若反相或离子对HPLC无效时，或样品不溶于水-有机混合液。可以选择正相HPLC体系。流动相选择有机溶剂混合液，色谱柱选择氰基、氨基、硅胶、二醇基。
c、初始分离条件（相对较好的首要选择、等度）
色谱柱：150X4.6mm、5um、固定相为C18或C8
流动相：缓冲液-乙腈，缓冲液可选择纯水或缓冲盐（浓度10~30mM）（若中性样品，无需使用缓冲盐）并用酸碱调控pH（如果pH小于2.5，建议选择pH稳定的色谱柱，避免固定相流失），乙腈起始比例可以选择80~100%。
离子对等添加剂，开始时请不要使用。流速1.0~2.0ml/min，柱温35~40℃。
样品：（最好以流动相溶解样品）进样体积小于25uL，进样量小于100ug。
d、液相方法基本目标
分离度：R大于1.5
分离时间：5~10min较理想
定量：RSD小于2%
压力：基本要求小于200bar（20M）
针对基本目标，按实际情况进行调整，譬如流动相实际组分比例，缓冲盐浓度及pH，柱温，梯度等。