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rkr0427

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[求助] 如何摸索液相色谱条件

如何摸索液相色谱条件，需经过哪些程序或者步骤

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1楼 2012-05-20 22:35:18

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痴夷子皮

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老痞

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【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
mouse103: 金币+5, 谢谢分享 2012-05-21 15:03:46
rkr0427: 金币+10, ★★★很有帮助 2012-05-21 19:29:28

1、如果能有相关的文献或资料参考，估计会相对比较简单。
2、条件摸索
a、样品性质
主要了解化合物的结构、分子量、pKa、UV、样品浓度范围、溶解度等。
b、色谱柱选择
样品能溶于水-有机混合液的大多数样品（特别是中性或非离子化合物），可以选择反相HPLC，流动相选择水-有机溶剂，色谱柱可以选择C18、C8、TMS、苯基、氰基。一般C18用得比较多。
样品为离子或可电离的化合物（特别是碱性或阳离子样品），可以选择离子对HPLC，流动相选择水-有机溶剂，控制pH的缓冲液和离子对试剂，色谱柱可选择C18、C8、氰基。一般C18用得比较多。
若反相或离子对HPLC无效时，或样品不溶于水-有机混合液。可以选择正相HPLC体系。流动相选择有机溶剂混合液，色谱柱选择氰基、氨基、硅胶、二醇基。
c、初始分离条件（相对较好的首要选择、等度）
色谱柱：150X4.6mm、5um、固定相为C18或C8
流动相：缓冲液-乙腈，缓冲液可选择纯水或缓冲盐（浓度10~30mM）（若中性样品，无需使用缓冲盐）并用酸碱调控pH（如果pH小于2.5，建议选择pH稳定的色谱柱，避免固定相流失），乙腈起始比例可以选择80~100%。
离子对等添加剂，开始时请不要使用。流速1.0~2.0ml/min，柱温35~40℃。
样品：（最好以流动相溶解样品）进样体积小于25uL，进样量小于100ug。
d、液相方法基本目标
分离度：R大于1.5
分离时间：5~10min较理想
定量：RSD小于2%
压力：基本要求小于200bar（20M）
针对基本目标，按实际情况进行调整，譬如流动相实际组分比例，缓冲盐浓度及pH，柱温，梯度等。

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守候在风中的宁静。

4楼2012-05-21 14:42:14

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sily48

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mouse103: 金币+1, 谢谢参与 2012-05-21 21:18:02

1.做全波长扫描找出物质的最大吸收值是的波长作为检测波长
2.查文献中的色谱条件
3.按照文献中的色谱条件跑标准品，如果是多种化合物要看在现有条件下溶剂峰和目标物质峰、目标物质峰之间是否能完全分开，峰型好坏（峰型最好是对称、没有拖尾的）。如果能完全分开且峰型良好就可以现有条件作为色谱条件。如果峰不能完全分开或峰型不好就要调整流动相比例，分别用不同的流动相比例进行实验，看在哪种流动相比例下能够使峰完全分开且峰型良好就用该比例作为流动相的配比。

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7楼2012-05-21 20:15:30

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