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[求助]
RNA电泳
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各位高手大家好，新手在此请教几个问题, 希望各位不吝赐教 请问我从细胞中提取出来的RNA经反转录用于后续PCR，要确定它的完整性，除了测OD值还要进行电泳表征吗？ 另外，测吸收时全部都要用DECP水吗？一定要用甲醛变性琼脂糖凝胶电泳吗，所有电泳时的溶液包括电泳缓冲夜、载样液等都要用DECP水吗，电泳槽要经特殊处理吗？ 我测RNAOD值时用普通二次水稀释后，测其OD值为1.875，是不是说明只测吸收不能说明RNA的完整性？ 先谢谢大家！ |
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 基因工程、分子技术、微生物理论 |
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xiaotianxin
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4楼2012-05-21 10:53:19
cheng_xiao
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2楼2012-05-20 17:16:20
【答案】应助回帖
★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
小丹木木: 金币+3, 鼓励应助，谢谢分享经验 2012-05-21 17:22:34
821078607: 金币+4, ★有帮助, 谢谢~~ 2012-05-21 22:23:42
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呵呵，我也是个新手，特别是对于细胞核酸的提取来说。我提植物组织的核酸较多。在此说一下我的感受。 1.RNA提取出来要验证其完整性，一般是通过测OD和跑电泳结合来看，OD260/OD280在1.6-2.0都可以，跑胶的话跑个普通的琼脂糖凝胶就可以了，主要是28s和18s的亮度，5s一般不能太亮，否则大都是降解了 2.测OD时稀释和空白最好用你溶RNA的液体，这样测得的结果才比较准确。电泳时电泳缓冲液和载样液其实也不用DEPC,不过最好换新鲜的电泳液。电泳槽拿纯净水冲冲就可以。跑胶过程比较快，RNA在此过程中也没么快降解。 3.只测OD260不能说明其完整性，但可以计算其浓度。 以上是个人实验的感受和经验，如有不对的地方还请指教，希望对你有所帮助！ |
3楼2012-05-21 01:17:31
5楼2012-05-21 11:09:46
