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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 药学 » 药物分析 » HPLC测定的样品，pH值应该在什么范围？
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wangyuanji

银虫 (小有名气)

[求助] HPLC测定的样品，pH值应该在什么范围？

最近准备检测大鼠脑中神经递质，查阅文献后发现，在样品前处理方法上，有很多种，有的用0.1M HClO4沉淀蛋白后直接进样，有的采用甲醇或乙腈沉淀蛋白后进样。我们实验室ECD（常用来测单胺类神经递质）和FD（常用来测氨基酸类神经递质）都有问题了可能不能用，所以只能选择样品衍生化后HPLC-UV检测了。我的问题是：
1）用0.1M HClO4沉淀蛋白后直接进样，pH值很低（<=2），这样直接进样会不会对进样阀色谱柱有影响？蛋白能沉淀完全吗？
2）采用HPLC-UV检测神经递质，需要衍生化，我看文献，沉淀蛋白后挥干溶剂，残渣用Na2CO3-NaHCO3（pH 9.5）复溶，加丹酰氯衍生化后进样。有谁做过这个衍生化反应吗？应该注意什么问题呢？同样，pH 9.5会对进样阀及色谱柱有影响吗？
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心态比能力重要
1楼 2012-05-18 16:17:05
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manengxuan

木虫 (小有名气)

木木

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
豆哥: 金币+1, 鼓励新虫，加油。 2012-05-18 21:09:31
一般的常规分析柱可以pH范围都是2-10.具体看你的色谱柱了吧。
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2楼2012-05-18 20:24:20
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xcc0703

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
豆哥: 金币+1, 鼓励新虫，加油。 2012-05-18 21:09:25
关于色谱柱选择
常见色谱柱的PH适用范围主要取决于色谱填料性质。
可供选择有1. 聚合物基质色谱柱，PH适用范围1~14，但主要缺点柱效比键合硅胶柱要差一点。当然有些聚合物基质填料的色谱柱柱效也很好，能满足分析要求。
2. 键和硅胶。低PH（﹤2）值长期使用的色谱柱有agilent的zorbax SB 和博纳艾杰尔的ASB 。
3.宽PH值色谱柱（1~12）有watersh的Xbridge，agilent 的extend，艾杰尔的Durashell。这几款柱子适用高PH值 流动相。
当然，还有其他合适的不同厂家的色谱柱。
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3楼2012-05-18 20:53:28
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yugijiang

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
leecius: 金币+1, 谢谢！ 2012-05-22 09:07:21
进样器和色谱柱都要注意其适用范围
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4楼2012-05-19 08:19:17
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lijin79833

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
leecius: 金币+1, 谢谢！ 2012-05-22 09:07:27
PH小于2对仪器及管路确实不好，PH大于9对仪器及管路没太大影响。不过，只要不是长时间使用，在没别的办法的情况下，也可以试一下，试验结束后，多冲洗即可。
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用心做好药
5楼2012-05-19 08:38:42
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libaoguo

铁杆木虫 (小有名气)

匆匆过客

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
leecius: 金币+1, 谢谢！ 2012-05-22 09:07:33
一起的使用，具体还是参照说明书比较好。因为各种体系，差别很大的。你也可以跟产品服务联系，他们的工程师会给你建议的
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日子，开始充实起来了
6楼2012-05-21 15:23:12
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Garpio

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
leecius: 金币+1, 谢谢！ 2012-05-22 09:07:38
主要是看你的色谱柱，看看耐受的pH范围是多少就可以了
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7楼2012-05-21 17:15:25
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hnsqwxp

木虫 (正式写手)

药剂科学家

【答案】应助回帖

★
leecius: 金币+1, 谢谢！ 2012-05-22 09:07:43
我的理解色谱柱的pH值耐受范围只针对流动相的pH值
至于样品的pH值低点或高点没多大影响吧。
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8楼2012-05-21 20:45:10
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wangyuanji

银虫 (小有名气)
各位，经进样阀进样后，在色谱柱前管道中至色谱柱顶端，样品在微细管道中与流动相是怎么一种状态呢？比如，样品溶剂与流动相不同，那么在管道中，样品是以一段液柱存在的吧？不与流动相混合？请各位多多发言讨论。
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心态比能力重要
9楼2012-05-22 08:20:49
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tsunamimiao

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
leecius: 金币+1, 谢谢！ 2012-05-22 09:07:51
柱子的ph范围是针对流动相的，样品的ph怎么样真的不知道，最好用ph范围大点的柱子
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10楼2012-05-22 08:57:02
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