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wangyuanji

银虫 (小有名气)

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[求助] HPLC测定的样品，pH值应该在什么范围？

最近准备检测大鼠脑中神经递质，查阅文献后发现，在样品前处理方法上，有很多种，有的用0.1M HClO4沉淀蛋白后直接进样，有的采用甲醇或乙腈沉淀蛋白后进样。我们实验室ECD（常用来测单胺类神经递质）和FD（常用来测氨基酸类神经递质）都有问题了可能不能用，所以只能选择样品衍生化后HPLC-UV检测了。我的问题是：
1）用0.1M HClO4沉淀蛋白后直接进样，pH值很低（<=2），这样直接进样会不会对进样阀色谱柱有影响？蛋白能沉淀完全吗？
2）采用HPLC-UV检测神经递质，需要衍生化，我看文献，沉淀蛋白后挥干溶剂，残渣用Na2CO3-NaHCO3（pH 9.5）复溶，加丹酰氯衍生化后进样。有谁做过这个衍生化反应吗？应该注意什么问题呢？同样，pH 9.5会对进样阀及色谱柱有影响吗？

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1楼 2012-05-18 16:17:05

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xcc0703

新虫 (小有名气)

应助: 3 (幼儿园)
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【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
豆哥: 金币+1, 鼓励新虫，加油。 2012-05-18 21:09:25

关于色谱柱选择
常见色谱柱的PH适用范围主要取决于色谱填料性质。
可供选择有1. 聚合物基质色谱柱，PH适用范围1~14，但主要缺点柱效比键合硅胶柱要差一点。当然有些聚合物基质填料的色谱柱柱效也很好，能满足分析要求。
2. 键和硅胶。低PH（﹤2）值长期使用的色谱柱有agilent的zorbax SB 和博纳艾杰尔的ASB 。
3.宽PH值色谱柱（1~12）有watersh的Xbridge，agilent 的extend，艾杰尔的Durashell。这几款柱子适用高PH值流动相。
当然，还有其他合适的不同厂家的色谱柱。