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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 药学 » 药物分析 » HPLC使用缓冲盐后如何冲柱
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倦怠阴天

木虫 (正式写手)

[求助] HPLC使用缓冲盐后如何冲柱

流动相：甲醇-0.1%磷酸（三乙胺调PH至6）=60:40
使用的是C18柱，由于液相接触不是很多，听说使用缓冲盐对柱子影响比较大，想请教一下大家，如何冲柱才能尽量减少缓冲盐对柱子的损坏
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1楼 2012-05-16 13:49:28
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

ziyu070602

铁杆木虫 (知名作家)

两娃娃的爹
引用回帖:
5楼: Originally posted by 女巫的小木屋 at 2012-05-16 14:56:00:
我的方法：90%水-10%乙腈，冲1个小时;
                70%水-30%乙腈，冲10分钟；
           30%水-70%乙腈，冲10分钟；
           10%水-90%乙腈，冲30分钟
仅供借鉴

你这样冲，柱子都不好意思再坏了
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我本将心比明月，奈何明月照沟渠。
7楼2012-05-16 17:07:40
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wddmq

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
豆哥: 金币+1, 谢谢参与交流 2012-05-16 14:52:17
先水相大比例冲，再换成有机相大比例冲，主要是防止缓冲盐在柱子中析出。对柱子损伤较大的是离子对试剂。你这个流动相三乙胺用量很小，基本上对柱子没什么损害的。
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1234
2楼2012-05-16 13:56:44
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普通回帖

lijin79833

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
leecius: 金币+1, 谢谢应助 2012-05-18 13:32:21
用甲醇：水60：40冲洗就可以，至少30倍柱体积。
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用心做好药
3楼2012-05-16 14:15:37
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xxaijwd

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
豆哥: 金币+1, 谢谢参与交流 2012-05-16 14:52:31
磷酸盐容易堵柱子和仪器。柱我们一般是用10%甲醇－水冲一小时后再用甲醇冲半小时。
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4楼2012-05-16 14:50:59
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女巫的小木屋

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
豆哥: 金币+1, 谢谢参与交流，但是用乙腈的话，成本就上去了啊~~~ 2012-05-16 15:49:56
我的方法：90%水-10%乙腈，冲1个小时;
                70%水-30%乙腈，冲10分钟；
           30%水-70%乙腈，冲10分钟；
           10%水-90%乙腈，冲30分钟
仅供借鉴
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5楼2012-05-16 14:56:00
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痴夷子皮

版主 (文坛精英)

老痞

优秀版主优秀版主

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
leecius: 金币+1, 谢谢应助 2012-05-18 13:32:30
1、大比例水相（eg：80%水-20%乙腈或甲醇），0.5ml/min，50min
2、梯度10min至大比例有机相（eg：80%乙腈或甲醇-20%水）0.5ml/min，40min
3、根据色谱柱保存条件选择，如95%或100%有机相保存，再过渡20min左右即可。
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守候在风中的宁静。
6楼2012-05-16 17:01:37
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qiute621

铜虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
leecius: 金币+1, 谢谢应助 2012-05-18 13:32:36
10%甲醇冲1.5h，再换纯甲醇冲1h，就ok
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我像只鱼儿自由自在地游
8楼2012-05-16 17:37:58
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倦怠阴天

木虫 (正式写手)
进样前柱子如何平衡？
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9楼2012-05-16 18:40:23
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兮兮岩

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
leecius: 金币+1, 谢谢参与！ 2012-05-18 13:32:42
先用较大比例的纯水冲柱，时间稍微长一点，然后逐渐增大甲醇的比例即可，
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10楼2012-05-16 21:27:14
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