应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

Znn3bq.jpeg
小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 请教RT-PCR 扩增问题
51/1返回列表
查看: 1410  |  回复: 8
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
本帖产生 1 个 MolEPI ，点击这里进行查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

luckking

金虫 (正式写手)

[求助] 请教RT-PCR 扩增问题

用的Takara  DR050s PCR扩怎程序大致为：
98℃——5min
·························
98℃——10
55℃——15s                 ×30循环
68℃——3min
·························
· 68℃——5min   
引物TM 为 66.1 和64.8  扩不出来条带怎么优化
回复此楼

» 收录本帖的淘帖专辑推荐

【分子生物】EPI帖

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2012-05-13 10:12:12
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

gjs713

至尊木虫 (职业作家)
我的观点与楼上兄弟有点儿不一样。。你引物TM 为 66.1 和64.8， 大概尝试用个58-60°的退火温度试试看呢。另外，能否把延伸温度提高至72°。
当然如果你用的是TAKARA的专用反转录试剂盒 情况就另当别论。。
赞一下 回复此楼
勤奋、执着、专注，则无坚不破。
9楼2012-05-14 22:41:56
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 9 个回答

luckking

金虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 西瓜 at 2012-05-13 10:42:26:
你片段多长？

2809
回复此楼
3楼2012-05-13 11:18:51
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

gywyl1977

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
luckking: 金币+2 2012-05-13 14:34:07
amisking: 回帖置顶 2012-05-13 17:34:40
做RT-PCR哪有用这么长的片段，扩增效率会很低。一般也就100-200bp。这么长的片断，P出来也不能说明问题。还有，循环数是要摸索的，太多的话就到了PCR的平台期，根本就看不出差别了，我们做细菌时循环数都在20个循环左右。
赞一下 回复此楼
4楼2012-05-13 12:19:30
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

西瓜

荣誉版主 (知名作家)
引用回帖:
4楼: Originally posted by gywyl1977 at 2012-05-13 12:19:30:
做RT-PCR哪有用这么长的片段，扩增效率会很低。一般也就100-200bp。这么长的片断，P出来也不能说明问题。还有，循环数是要摸索的，太多的话就到了PCR的平台期，根本就看不出差别了，我们做细菌时循环数都在20个循 ...

楼主估计是要扩增基因，不是做定量。RT-PCR是反转录PCR的简称，即反转录PCR，只要是用cDNA做模板的PCR都可以称为RT-PCR,不是专门指定量的哦。
定量PCR的简称是qPCR。另外，荧光定量PCR即real-time PCR是不简写为RT-PCR的（为了与反转录PCR区分）。如果是用cDNA为模板做real-time，得称为qRT-PCR。
赞一下 回复此楼

» 本帖已获得的红花（最新10朵）

luckking
5楼2012-05-13 14:40:52
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 9 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[有机交流] 二苯甲酮酸类衍生物 50+3 小白爱主人 2026-04-17 4/200 2026-04-17 11:18 by czyzsu
[考研] 279求调剂 +13 张番茄不炒蛋 2026-04-11 13/650 2026-04-17 10:38 by cuisz
[考研] 材料相关专业344求调剂双非工科学校或课题组 +23 hualkop 2026-04-12 25/1250 2026-04-16 22:12 by SUSE_CL
[考研] 291求调剂 +11 关忆北. 2026-04-14 11/550 2026-04-16 15:18 by jiahl2024
[考研] 求调剂 +11 小聂爱学习 2026-04-11 15/750 2026-04-15 21:57 by noqvsozv
[考研] 通信工程求调剂！！！ +6 zlb770521 2026-04-14 6/300 2026-04-15 20:00 by 学员JpLReM
[考研] 085801电气专硕272求调剂 +19 电气李 2026-04-13 21/1050 2026-04-15 13:37 by 黑科技矿业
[考研] 各位老师好，求调剂，本科211，一志愿天津大学生物与医药学硕，差两名录取。 +11 路六六jjj 2026-04-13 11/550 2026-04-14 16:01 by zs92450
[考研] 271求调剂 +35 2261744733 2026-04-11 41/2050 2026-04-14 15:36 by zs92450
[考研] 一志愿沪9，326求生物学调剂 +10 刘墨墨 2026-04-13 10/500 2026-04-14 15:16 by zs92450
[考研] 105500药学求调剂 +4 x_skys 2026-04-12 4/200 2026-04-14 13:37 by rndfc
[考研] 085408光电信息工程专硕355一志愿长春光机所调剂 +6 王ymaa 2026-04-13 13/650 2026-04-14 11:33 by 王ymaa
[考研] 305求调剂 +8 玛卡巴卡boom 2026-04-11 8/400 2026-04-14 09:04 by pengliang8036
[考研] 调剂结束 +6 floriea 2026-04-12 8/400 2026-04-12 18:13 by zhouxiaoyu
[考研] 303求调剂 +14 SereinQ 2026-04-10 15/750 2026-04-11 20:43 by 蓝云思雨
[考研] 一志愿985机械学硕380求调剂 +5 关关雎鸠10 2026-04-11 5/250 2026-04-11 10:10 by 知念。A
[考研] 337求调剂 +4 研s. 2026-04-10 4/200 2026-04-11 08:57 by zhq0425
[考研] 346，工科0854求调剂，专硕 +7 moser233 2026-04-10 8/400 2026-04-11 08:52 by 猪会飞
[考研] 263能源动力专硕求调剂 +3 加大号饭盒袋 2026-04-10 3/150 2026-04-10 22:23 by 286640313
[考研] 初试261 +3 Asht少 2026-04-10 6/300 2026-04-10 16:38 by Asht少
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭