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测小鼠中血药浓度的几个问题
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本人学化学的，对药代动力学方面不是很了解，有几个问题想请教大家： 1.用HPLC测血药浓度，取1ml 全血后，加1%肝素钠立即摇匀，离心3500转/分，10分钟，分离血浆。这个转速和时间可以吗？肝素钠加多少？ 2.沉淀蛋白：取血浆0.5ml，加甲醇（血浆：甲醇=3：1），旋涡1min，4000转/分，10分钟，取上清液，于50℃水浴氮气吹干，1mL超纯水复溶，旋涡1 min。什么叫旋涡？如果不氮气吹干，可否用其它方法？还有是否要复溶呢？ 3.准备用液-液萃取：甲醇溶解上述上清液，（有机相：水相=2：1），高速离心，请上清于HPLC进样测量。请问，除了甲醇还有别的溶剂可选择吗？我准备预实验时试一下。高速离心速度多少才合适，离心时间呢？ 4.我看还有个浓集的步骤，请问是怎么操作呢？ 5.这些操作，比如2中取血浆，用移液枪合适吗，还是要用微量注射器，移液管之类的呢？ 问题有点多，请了解的大侠们指点指点。谢谢。 |
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2楼2012-05-11 13:00:05
rainbow_zyt
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【答案】应助回帖
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感谢参与，应助指数 +1
豆哥: 金币+1, 谢谢参与交流 2012-05-14 08:58:50
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问题一：转速和时间合适，肝素钠加入量的原则是：1ml的血液需要肝素0.1-0.2mg或者20IU（1mg相当于126IU），具体看你使用的肝素的活性配制一定浓度的水溶液就可以，这个量不要求太准确。 问题二：涡旋就是充分的混合，让蛋白质沉淀，让你的药物从蛋白质中释放出来。不用氮气吹干，可以用真空旋转蒸干，但是如果你的量很少的话，损失很严重，因此建议用氮气吹干，氮气又不贵。 问题三：液相流动相的选取是要参考你的目标检测物的，除了甲醇，还有乙腈等可以选择，乙腈的效果一般比甲醇好些，但是具体问题具体分析。 问题四：药物的浓缩富集有很多种方法，例如过柱子洗脱富集、蒸干溶剂富集等等，找到一种合适自己的，具体操作要看你选取什么样的富集方法。 问题五：移液枪当然操作起来比移液管之类的简单而且，对于微升级别体积的溶液你能用移液管吗？ 建议去图书馆找相关书籍看看 |
3楼2012-05-11 16:53:16
4楼2012-05-13 13:21:29
believe123
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5楼2012-06-01 16:31:47
【答案】应助回帖
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1.用HPLC测血药浓度，现在管子中加10ul肝素，取0.3ml（太多老鼠要死了） 全血后，，离心8000转/分，5分钟，分离血浆。 2.沉淀蛋白：取血浆0.5ml，加甲醇（血浆：甲醇=3：1），旋涡1min，4000转/分，10分钟，取上清液，于50℃水浴氮气吹干，1mL超纯水复溶，旋涡1 min。什么叫旋涡（就是旋涡振荡）？如果不氮气吹干，可否用其它方法（空气吹干）？还有是否要复溶呢（那干的你怎么进样，下面你要液液萃取，岂能没液）？ 3.准备用液-液萃取：甲醇溶解上述上清液，（有机相：水相=2：1），高速离心，请上清于HPLC进样测量。请问，除了甲醇还有别的溶剂可选择吗？我准备预实验时试一下。高速离心速度多少才合适，离心时间呢（20000or150000 10min）？ 4.我看还有个浓集的步骤，请问是怎么操作呢？ 5.这些操作，比如2中取血浆，用移液枪合适吗（合适，200的），还是要用微量注射器，移液管之类的呢？ 问题有点多，请了解的大侠们指点指点。谢谢。 |
6楼2012-06-01 16:50:09
白水6177
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