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thestormcong

银虫 (小有名气)

[求助] pcr退火时间

大家好,请教一个pcr的问题。我的引物长度约为70多个bp,那么在设计程序的时候,引物的退火时间大概要多长呢,谢谢!
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thestormcong

银虫 (小有名气)

引用回帖:
16楼: Originally posted by 西瓜 at 2012-05-09 19:00:22:
最近刚做了个引物是60bp的PCR,退火时间仍跟普通PCR一样用的30秒,没有问题。楼主的估计40秒足矣。其实长那么几十个bp,个人认为对退火时间没有太大影响,对退火温度可能还有点影响。我建议楼主先按平常PCR的条件 ...

可是二次pcr的效果总是不那么好。无奈。
17楼2012-05-09 20:12:20
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jmmchen

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
引物越长,退火时间应稍微长一些,1min左右应该可以。

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面朝大海,春暖花开
2楼2012-05-08 21:09:32
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张宏宇123

金虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
西瓜: 金币+2, 鼓励交流 2012-05-09 18:56:21
Tm=4(G+C)+2(A+T),Tm值比退火温度高5-15度。
退火温度一般为55度-60度,GC<50%,一般用55度;GC>50%,一般用60度。若有非特异性带,可提高退火温度,但最好不要高于68度,合适的退火温度在45-68度。

» 本帖已获得的红花(最新10朵)

未来不是梦
3楼2012-05-08 21:12:58
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张宏宇123

金虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★
小丹木木: 金币+2, 呵呵,我一般也这么算的 2012-05-09 13:56:46
退火时间主要看你要扩增多大的片段,已经用什么酶。
taq酶一般是按一分钟1000bp算
未来不是梦
4楼2012-05-08 21:14:30
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