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红楼隔雨金虫 (初入文坛)
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[求助]
请教pNP法测定酯酶活性实验中的问题 已有1人参与
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各位大侠，我最近要对某类细菌进行酯酶活性测定的实验。由于之前没有接触过，对这一块完全空白。我查过一些资料最后选择用pNPA法来测定酯酶的活性。我的问题是，我用Tris-HCl缓冲液溶解pNP作标准曲线，发现它很难溶，后来摸索发现用5%乙醇-Tris-HCl缓冲液可以配出溶液，于是就这么做出了标准曲线。但是到我 配制1mM pNPA溶液的时候，我再次发现，我用乙醇也溶解不了它（TAT）。 因为这时候再查了些资料，发现乙醇对酶活性有抑制，所以不敢用太高的浓度。 此外，我看过论坛的相关资料，发现有人说可以用乳化剂来溶解pNPB，制成乳化液。但是具体怎么做没有说明，烦请知道的大侠讲解一下~~ 还有我看到有人说用酶标仪来做这个实验，我一直都是用紫外分光光度计做的，请问用酶标仪做的话结果会准一些吗？反应体积会不会太小了？ 先谢谢各位！！！！ |
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