24小时热门版块排行榜    

查看: 1901  |  回复: 12
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

elbo

金虫 (小有名气)

[求助] PCR问题求教

扩增细菌16S rDNA,通用引物,反应体系25ul, 用TAKARA的premix,1ul模板(含量大于40ng/ul,每孔所用模板DNA不同),1.5ul引物(10umol/L)。扩增条件,94预变性3min,94,52,72各1min,25循环,72延伸10min。1%凝胶检测如下图,最左侧为不加模板的阴性对照.最右边为Marker(第4个带为1500bp).为什么只有个别扩增出来,而且怎么有这么多的引物二聚体?退后温度低?还是模板含量太少??
请各位达人不吝赐教啊!!

1% agarose
回复此楼
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xiaoyanzi517

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
西瓜: 金币+1, 鼓励交流 2012-05-04 18:45:21
根据你的图,个别有,个别没有,所以我首先怀疑是模板原因造成的。如果是PCR条件不适合,那应该是所有的都没有条带。所以,每次批次实验前,测定所有的样本质量,看纯度和浓度,再决定加入的量。
偶时晴天偶时雨
12楼2012-05-04 14:10:03
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 13 个回答

孙启亮

金虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
小丹木木: 金币+2, 专家考核, 辛苦辛苦 2012-05-03 13:40:31
从图上看你所有样品都有二聚体。可能原因之一就是引物二聚体,就是引物以自己为模板把自己扩增出来了。原因之二可能是体系被污染,原因之三可能是退火温度太低。我认为前两个原因的可能性较大,建议做个NTC,同时换个无酶水
2楼2012-05-02 20:20:26
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

孙启亮

金虫 (著名写手)

不好意思,刚看了一下,你已经做了NTC,所以最可能的原因是引物自身,引物以自己为模板把自己扩增出来了
3楼2012-05-02 20:21:57
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

elbo

金虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 孙启亮 at 2012-05-02 20:20:26:
从图上看你所有样品都有二聚体。可能原因之一就是引物二聚体,就是引物以自己为模板把自己扩增出来了。原因之二可能是体系被污染,原因之三可能是退火温度太低。我认为前两个原因的可能性较大,建议做个NTC,同时 ...

那么出现 引物二聚体的原因?引物是新配置的。
4楼2012-05-03 05:52:17
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 材料学硕318求调剂 +8 February_Feb 2026-03-01 8/400 2026-03-02 13:13 by relum
[考研] 338求调剂 +3 18162027187 2026-03-02 3/150 2026-03-02 13:12 by houyaoxu
[考研] 289求调剂 +3 yang婷 2026-03-02 3/150 2026-03-02 13:08 by houyaoxu
[考研] 26考研报考西工大材料308分求调剂 +4 weizhong123 2026-03-01 4/200 2026-03-02 12:46 by 无际的草原
[考研] 材料工程274求调剂 +4 Lilithan 2026-03-01 4/200 2026-03-02 12:06 by yuchj
[考研] 268求调剂 +4 简单点0 2026-03-02 5/250 2026-03-02 11:54 by ms629
[基金申请] 此成果不能导入原因:元数据必填信息不完整,可 进行补充。 +4 Kittylucky 2026-03-02 5/250 2026-03-02 11:07 by jurkat.1640
[考研] 化工专硕342,一志愿大连理工大学,求调剂 +6 kyf化工 2026-02-28 7/350 2026-03-02 10:56 by 无际的草原
[考研] 0856材料调剂 +4 沿岸有贝壳OUC 2026-03-02 4/200 2026-03-02 10:19 by 公瑾逍遥
[考研] 调剂 +3 13853210211 2026-03-02 4/200 2026-03-02 10:16 by 13853210211
[考研] 材料工程269求调剂 +3 白刺玫 2026-03-02 3/150 2026-03-02 09:25 by 一休哥FU
[考研] 高分子化学与物理调剂 +6 好好好1233 2026-02-28 13/650 2026-03-02 07:27 by 好好好1233
[基金申请] 本子写完了,给DS兄弟看了,得了92分 +3 Doma 2026-03-01 7/350 2026-03-02 00:00 by jnzsy
[考研] 江苏省农科院招调剂1名 +3 Qwertyuop 2026-03-01 3/150 2026-03-01 23:18 by aaadim
[考研] 306分材料调剂 +4 chuanzhu川烛 2026-03-01 5/250 2026-03-01 19:48 by 无际的草原
[考研] 298求调剂 +6 axyz3 2026-02-28 6/300 2026-03-01 19:00 by 18137688336
[考研] 298求调剂 +9 人间唯你是清欢 2026-02-28 12/600 2026-03-01 14:23 by Ducount.Y
[考研] 调剂 +3 简木ChuFront 2026-02-28 3/150 2026-03-01 11:46 by 王伟要上岸啊
[考研] 304求调剂 +3 52hz~~ 2026-02-28 5/250 2026-03-01 00:00 by 52hz~~
[考研] 085600材料工程一志愿中科大总分312求调剂 +8 吃宵夜1 2026-02-28 10/500 2026-02-28 20:27 by L135790
信息提示
请填处理意见