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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 化学化工区 » 分析 » 分析前沿 » Agilent HPLC ， UV/DAD 测ATP，样品里有GFP 怎么办
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挣扎的实验

新虫 (初入文坛)

[求助] Agilent HPLC ， UV/DAD 测ATP，样品里有GFP 怎么办

大家好，我是做生物医学的，马上要做细胞内ATP测定。打算交给外单位做，他们用
Agilent HPLC  ， UV/DAD  测定。
但是我的一些细胞表达GFP 蛋白， 我想知道 这样对测定的结果有没有影响？
我是HPLC大白，所以不懂。 因为我知道GFP蛋白在UV下是可以观察到绿色荧光的。

那么 这些含有GFP蛋白的细胞裂解液，在用作测ATP时，会不会显示出有GFP表达？还是和普通的样品（无GFP的蛋白的细胞裂解液）没有任何区别？

灰常的急。。。在线等答案~ 请各位前辈们帮忙解答
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1楼 2012-05-01 16:00:41
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痴夷子皮

版主 (文坛精英)

老痞

优秀版主优秀版主

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
使用的是紫外检测器，GFP 蛋白最大吸收波长应该在280nm附近，ATP UVmax是257（如果没有查错的话），用紫外检测器分析，选择的波长可能是257nm左右，该波长下ATP的响应值较高，且只要色谱条件合理，能使ATP和蛋白分离（如果蛋白出峰，如果不出峰就更好了），估计问题不大。也就是说，可以做过蛋白不干扰ATP的检测。
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守候在风中的宁静。
2楼2012-05-02 19:02:03
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