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挣扎的实验

新虫 (初入文坛)

[求助] Agilent HPLC , UV/DAD 测ATP,样品里有GFP 怎么办

大家好,我是做生物医学的,马上要做细胞内ATP测定。打算交给外单位做,他们用
Agilent HPLC  , UV/DAD  测定。
但是我的一些细胞表达GFP 蛋白, 我想知道 这样对测定的结果有没有影响?
我是HPLC大白,所以不懂。 因为我知道GFP蛋白在UV下是可以观察到绿色荧光的。

那么 这些含有GFP蛋白的细胞裂解液,在用作测ATP时,会不会显示出有GFP表达?还是和普通的样品(无GFP的蛋白的细胞裂解液)没有任何区别?

灰常的急。。。在线等答案~ 请各位前辈们帮忙解答
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痴夷子皮

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【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
使用的是紫外检测器,GFP 蛋白最大吸收波长应该在280nm附近,ATP UVmax是257(如果没有查错的话),用紫外检测器分析,选择的波长可能是257nm左右,该波长下ATP的响应值较高,且只要色谱条件合理,能使ATP和蛋白分离(如果蛋白出峰,如果不出峰就更好了),估计问题不大。也就是说,可以做过蛋白不干扰ATP的检测。
守候在风中的宁静。
2楼2012-05-02 19:02:03
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