| 查看: 1551 | 回复: 5 | |||
| 当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖 | |||
[交流]
DGGE实验问题 已有4人参与
|
|||
|
最近刚开始做DGGE实验（研究土地渗滤处理系统中微生物多样性，以前读硕士时自己做过多次。现在做了5次DGGE了，一直出现同样的问题：DNA全部在上样孔，一点都没有跑，下面什么都没有。可见下图： PCR引物：细菌通用引物 GC-341F和907R （560 bp，属于常用和经典的引物） PCR扩增结果跑琼脂糖电泳检测过，亮度和特异性还可以，见附图。 DGGE条件： 6%的胶 变性梯度：20-80% 上样量：30 uL + 20 loading buffer 电压：140 V， 16h。 电流：50 mA左右 染色：gelred （后染，30min） 出现两次同样的问题（DNA根本没跑，但可以看到loading buffer 中的溴酚蓝明显在跑），做了如下分析： 1. 检查了TAE buffer的pH值，8.2左右，应该正常； 2.更换了全部试剂（全部换成sigma的），结果还是一样。 3.检查了电压和电流，应该正常啊，跑胶时刻明显看到溴酚蓝在跑，电流40-50mA应该也正常啊，也可明显看到正负极产生向上的气泡（电解过程）应该也正常啊。 我现在是在是不知道什么问题了？请大家帮忙分析分析啊。  PCR产物琼脂糖电泳结果  第一次的DGGE图片v1  第一次的DGGE图片v2  第二次的DGGE图片  全部更换为sigma的试剂后的DGGE图片v1  全部更换为sigma的试剂后的DGGE图片v2 |
回复此楼» 猜你喜欢
Wnt-C59：PORCN靶向化学探针，Wnt信号通路阻断机制与科研应用全解析
已经有0人回复
-
Fexaramine：肠道限制性FXR化学探针，结构特征与信号通路研究全解析
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有226人回复
-
NVS-STG2：靶向STING跨膜域的分子胶类激动剂，结构特征与寡聚化机制研究全解析
已经有0人回复
-
DOTA-GPC3肽（CAS 3066439-94-6）：双功能分子探针前体的结构特征与标记应用解析
已经有0人回复
-
科研用 TLR7/8 双激动剂怎么选？现货与质控要点
已经有0人回复
-
SEL120-34A HCl：CDK8/CDK19高选择性激酶抑制剂
已经有0人回复
-
氢氧化钾活化操作
已经有18人回复
-
散金
已经有68人回复
-
生物质超级电容器
已经有0人回复
» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 关于PCR的基础问题
已经有13人回复
- 求海洋古细菌的dgge引物
已经有4人回复
- bio-rad DGGE漏胶问题
已经有8人回复
- pcr-dgge分析土壤微生物群落要做平行样吗？
已经有6人回复
- 土壤真菌PCR-DGGE中真菌ITS区引物的选择
已经有10人回复
- 求助 SSR实验技术
已经有14人回复
- WB实验，胶片问题
已经有10人回复
- 求助高手分析DGGE图谱，附PCR图和DGGE图谱
已经有6人回复
- 【求助】DGGE生产厂家
已经有13人回复
nanjizhou91
木虫 (小有名气)
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 2758.8
- 帖子: 151
- 在线: 38.9小时
- 虫号: 2840019
- 注册: 2013-12-01
- 性别: MM
- 专业: 作物栽培与耕作学
6楼2014-09-23 11:17:51
ctt1984
木虫 (正式写手)
初学者
- MolEPI: 2
- 应助: 16 (小学生)
- 金币: 4756.6
- 散金: 486
- 红花: 3
- 帖子: 788
- 在线: 524.4小时
- 虫号: 805645
- 注册: 2009-07-08
- 性别: GG
- 专业: 食品加工技术
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
|
1, 这个引物没用过，但是根据个人经验来看过大了。一般通用引物我用的是199bp左右，很好用。细菌 338f (F) ACTCCTACGGGAGGCAGCAG 518r (R) ATTACCGCGGCTGCTGG 48℃ GC序列：CGCCCGGGGCGCGCCCCGGGCGGGGCGGGGGCACGGGGGG 2，你上样量太大，一般5ul就够了，有时候2ul都可以。 3,一开始先用220v电压把DNA冲下来，之后用140v跑6-7小时或者80v跑16小时 4，还有一点我很怀疑哈，你小子是不是把胶灌反了？我们一般从上往下是低---高，你要是反的话跑不下来很正常。 我觉得主要就是这两点，其他的看了下没问题。 |
2楼2012-05-01 04:25:11
3楼2012-05-26 09:12:27
4楼2012-05-26 09:14:36
投票:
30