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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » SDS-PAGE凝胶电泳求教
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ywmwiw

新虫 (初入文坛)

[交流] SDS-PAGE凝胶电泳求教 已有9人参与

最近一直在跑凝胶电泳，Marker的条带应该有6条，可是跑了无数次都只跑出了5条，只有偶尔能跑出6条（跑出6条的机率跟中大奖差不多），曾请教过一位师姐，得知电流太大，之后按浓缩胶（50v，28-33mA）分离胶（80v，38-43mA）跑了几次都不成功（师姐能跑出来了），胶的各种配方和每块胶都是本人自己配的（包括师姐跑的那次），请问各位高手这是为什么呢？
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1楼 2012-04-25 11:16:26
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ixido

木虫 (小有名气)
★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
西瓜: 金币+2, 鼓励交流 2012-04-26 21:50:26
感觉楼主跑胶条件电流也不小啊。
跑胶时间可以延长一点，让溴酚蓝前沿跑到最底下，然后染色脱色的时候不要把溴酚蓝切掉看看。有时候marker最后一条带会和溴酚蓝前沿在一起分不开。如果还是不行的话，建议楼主改变一下分离胶的浓度。

其实，少一条没多大关系的，只要你的目的蛋白在能看到marker的区间就行。不要太纠结了。
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11楼2012-04-26 18:15:33
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rice1007

禁虫 (正式写手)
★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
小丹木木: 金币+2, 鼓励交流 2012-04-25 13:51:34
本帖内容被屏蔽
2楼2012-04-25 11:28:57
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0624410024

金虫 (正式写手)

Begging for knowledge
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
那就是你的人品问题了～～～～～～～～
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每天坚持多一点，以后困难少一点！
3楼2012-04-25 16:32:10
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rhguo

铜虫 (小有名气)
★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
小丹木木: 金币+2, 鼓励交流 2012-04-26 15:52:38
同样的问题我也碰到过，到现在也是这样，这种情况往往会以胶的底部有一条线，线，最后一条Marker就在那条线上面，染色的时候线以下什么条带都没有了，线以上正常染色；至于 为什么会形成那条线，我现在也不知道；估计是前面的蛋白都积在一起了，分不开，可能是SDS不够处理样品的时候可以多加一些上样缓冲液，在电泳缓冲液里稍微多加一些SDS看下效果
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4楼2012-04-25 19:53:47
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