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ywmwiw

新虫 (初入文坛)

[交流] SDS-PAGE凝胶电泳求教已有9人参与

最近一直在跑凝胶电泳,Marker的条带应该有6条,可是跑了无数次都只跑出了5条,只有偶尔能跑出6条(跑出6条的机率跟中大奖差不多),曾请教过一位师姐,得知电流太大,之后按浓缩胶(50v,28-33mA)分离胶(80v,38-43mA)跑了几次都不成功(师姐能跑出来了),胶的各种配方和每块胶都是本人自己配的(包括师姐跑的那次),请问各位高手这是为什么呢?
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ixido

木虫 (小有名气)

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西瓜: 金币+2, 鼓励交流 2012-04-26 21:50:26
感觉楼主跑胶条件电流也不小啊。
跑胶时间可以延长一点,让溴酚蓝前沿跑到最底下,然后染色脱色的时候不要把溴酚蓝切掉看看。有时候marker最后一条带会和溴酚蓝前沿在一起分不开。如果还是不行的话,建议楼主改变一下分离胶的浓度。

其实,少一条没多大关系的,只要你的目的蛋白在能看到marker的区间就行。不要太纠结了。
11楼2012-04-26 18:15:33
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rice1007

禁虫 (正式写手)

★ ★ ★
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小丹木木: 金币+2, 鼓励交流 2012-04-25 13:51:34
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2楼2012-04-25 11:28:57
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0624410024

金虫 (正式写手)

Begging for knowledge


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
那就是你的人品问题了~~~~~~~~
每天坚持多一点,以后困难少一点!
3楼2012-04-25 16:32:10
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rhguo

铜虫 (小有名气)

★ ★ ★
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小丹木木: 金币+2, 鼓励交流 2012-04-26 15:52:38
同样的问题我也碰到过,到现在也是这样,这种情况往往会以胶的底部有一条线,线,最后一条Marker就在那条线上面,染色的时候线以下什么条带都没有了,线以上正常染色;至于 为什么会形成那条线,我现在也不知道;估计是前面的蛋白都积在一起了,分不开,可能是SDS不够处理样品的时候可以多加一些上样缓冲液,在电泳缓冲液里稍微多加一些SDS看下效果
4楼2012-04-25 19:53:47
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